تهیه مواد جایگزین سرم جنین گاو و بررسی اثر آن ها بر رشد دودمان های سلولی هیبریدومایی و میزان ترشح آنتی بادی های منوکلونال

سابقه و هدف: دست یابی به منابع جایگزین سرم جنین گاو به عنوان ماده مغذی کشت سلول به علت کمبود این نوع سرم و نیازهای متفاوت سلول های مختلف همواره مورد بررسی می باشد . این مطالعه به تهیه مواد مغذی جانشین سرم جنین گاو و بررسی اثر آن ها بر رشد سلول ها و ترشح آنتی بادی های منوکلونال توسط دودمان های سلولی هیبریدومایی پرداخته است.مواد وروش ها: مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پلاکت های تاریخ گذشته با گروه های مختلف به منظور استخراج عوامل رشد موجود در آن ها مورد استفاده قرار گرفتند. پلاسما با گروه AB نیز به سرم تبدیل شد و اثر آن با محیط های حاوی سرم جنین گاو, هیپوگزانتین ـ تیمیدین (HT) و1640 RPMI مورد مقایسه قرار گرفت. شاخص های رشد مورد ارزیابی شامل شمارش ابتدایی سلول ها, Confluency (میزان پر شدن چاهک) روزانه و تیتراسیون آنتی بادی های منوکلونال آنتی A و آنتی B گروه های خونی بودند. آنالیز آماری شامل آزمون t تک نمونه ای, برازش منحنی رگرسیون چندگانه لگاریتمی و تحلیل عاملی منحنی های رشد توسط نرم افزار 12 SPSS انجام شد.یافته ها: چهار ماده مغـذی سـرم AB انسانـی (AB), سرم جنین گاو (FCS), عصاره پلاکتی انسان (PLT) و مخلوط AB و PLT (ABP) جهت رشد سلول های هیبریدومایی موشی تولیدکننده آنتی سرم های گروه های خونی A و B مورد ارزیابی قرار گرفتند و با شاخص های رشد در محیط پایه 1640 RPMI مقایسه شدند. بیشترین اثر مثبت بر رشد به ترتیب نزولی عبارت بود از: 1- 5% ABP , 2- 10% FCS , 3- 10% ABP , 4- 5% AB , 5- 10% AB , 6- 5% PLT , 7- 20% ABP , 8- 10% PLT , 9- 20% PLT , 10- هیپوگزانتین ـ تیمیدین و تنها 20% AB مانع رشد گردید. تیتر آنتی A و آنتی B ایجاد شده توسط هیبریدوم ها در مقادیر 5 و 10 درصد از PLT , AB و مخلوط این دو (ABP) نسبت به FCS 5 تا 10 درصد به ترتیب نزولی به صورت زیر به دست آمد: 1- 5% PLT , 2- 10% PLT , 5% ABP ,10% ABP , 10% AB , 3- 5% AB .نتیجه گیری: به طور کلی FCS دارای بیشترین اثر در شیب تکثیر و مرگ و کمترین اثر در مرحله ثبات منحنی رشد سلول ها می باشد لذا جهت تکثیر سلول ها در شمارش پایین مناسب به نظر می رسد. سرم AB , عصاره پلاکتی و مخلوط این دو در مقادیر مناسب دارای شیب کمتر تکثیر نسبت به FCS بوده و باعث طولانی شدن مرحله ثبات و کاهش شیب مرگ می گردند (این مواد در غلظت های بالا باعث مرگ سلول ها می شوند). بنابراین ممکن است جهت کشت سلول در سیستم های ممتد کشت مناسب باشند.