تشخیص مولکولی لپتوسپیرای پاتوژن به روش PCR

لپتوسپیروزیس یک عفونت حاد سیستمک و سپتیسمیک است که در سالیان اخیر در مناطقی از ایران بویژه استانهای شمالی شیوع داشته است. در این بیماری تشخیص سریع مرحله حیاتی برای درمان و کنترل بیماری است. در این تحقیق کارایی روش PCR برای تشخیص سرووارهای موجود در ایران بررسی شد. تمام سرووارهای پاتوژن گزارش شده چون لپتوسپیرا کانیکولا, لپتوسپیرا پومونا, لپتوسپیرا گریپوتیفوزا, لپتوسپیرا ایکتروهموراژیه و لپتوسپیرا سجروهارجو که هم اکنون برای تست آگلوتیناسیون میکروسکوپی لپتوسپیرا (LMAT) در ایران استفاده می شود, در این مطالعه بررسی شد. همچنین سویه های مرجع استاندارد از ATCC آمریکا تهیه و در کنار سایر سویه های موجود بررسی شد. DNA به روش رسوب با فنل - کلروفرم - ایزوآمیل الکل تهیه شد. بعد از بهینه سازی, حساسیت روش تا حد 1 فمتوگرم معادل DNA یک لپتوسپیرا بود. تمام سویه های لپتوسپیرای مورد مطالعه از جمله لپتوسپیرا بایفلکسا غیر پاتوژن قطعه 285 بازی مورد انتظار را تولید می نمودند. آنالیز با آنزیم محدود کننده Mbo I صحت قطعه را تایید کرد. در مورد لپتوسپیرا بایفلکسا الگوی الکتروفورز PCR کاملا متفاوت از سایرین بود. این سیستم PCR در هیچکدام از سایر باکتری های مورد مطالعه باندی ایجاد ننمود. وجود DNA لپتوسیپرا در تمام نمونه های سرم مثبت (با (LMAT با این روش نشان داده شد. در حالی که نمونه های سرم منفی باندی نشان نمیدادند.