شناسایی سریع Clostridium perfringens تایپ های A ،B ،C ،D به روش Multiplex PCR

Clostridium perfringens بخشی از فلور طبیعی خاک می باشد و گزارشات متعددی از جدا شدن این ارگانیسم از مواد غذایی خام و پخته وجود دارد. این باکتری به پنج تایپ A تا E تقسیم شده است و این تقسیم بندی بر اساس تولید سم آلفا, بتا, اپسیلون و یوتا می باشد. در این مطالعه از واکنش multiplex PCR جهت شناسایی باکتری Cl. perfringens تایپ های D و C وB  و A استفاده شد. تایید اولیه تیپ های باکتریایی مورد استفاده با روش بیوشیمیایی و سرولوژیکی صورت گرفت. جهت شناسایی بوسیله PCR, چهار جفت پرایمر با دمای ذوب نزدیک به هم طراحی گردید. قطعات تکثیر یافته برای تیپ A, 1167 جفت باز (سم آلفا) و برای تیپ B, 1167 و 1025 و 961 جفت باز (سم آلفا, سم بتا و سم اپسیلون) و برای تیپ C, 1167 و 1025 جفت باز (سم آلفا و سم بتا) و برای تیپ D, 1167 و 961 جفت باز (سم آلفا و سم اپسیلون) بود. جهت بررسی ویژگی واکنش از باکتری Cl. botulinum به عنوان کنترل منفی استفاده شد که نتایج PCR آن با پرایمرهای طراحی شده منفی بود. نتایج این تحقیق نشان داد که شناسایی کلستریدیوم پرفرنجنس با استفاده از multiplex PCR بسیار ساده, حساس, اختصاصی و در حداقل زمان بوده و می توان جهت تعیین تایپ های A و B و C وD Cl.perfringens  استفاده نمود.