بررسی شرایط بهینه تولید آنزیم بتاگلوکوزیداز توسط قارچ (Trichoderma reesei (PTCC5142

بتاگلوکوزیداز از آنزیم های سلولازی میباشد که سلوبیوز و سلوالیگوساکاریدهای با زنجیره کوتاه را به گلوکز تجزیه می نماید. در این تحقیق از 30 جدایه تریکودرما که اکثرا بومی ایران بودند جهت مطالعه میزان تولید این آنزیم استفاده گردید. با توجه به نقش عوامل مختلفی نظیر زمان کشت, دما, pH نوع منبع کربن و عوامل القا کننده بر میزان تولید آنزیمهای سلولازی توسط قارچها, شرایط بهینه تولید آنزیم بتاگلوکوزیداز, در جدایه Trichoderma reesei (PTCC) 5142 که در تحقیقات قبلی مشخص شده بود از فعال ترین جدایه های تولیدکننده آنزیم های سلولازی می باشد) مطالعه گردید. بدین منظور از محیط کشت مندلز حاوی یکی از منابع کربنی CMC, Avicel و یا کاغذ صافی, با pH های 4, 5, 6 و 7, لاکتوز و سلوبیوز به عنوان عوامل القا کننده در طول 14 روز کشت در دماهای 25, 29 و 32 درجه سانتی گراد استفاده گردید. نتایج بدست آمده نشان داد که شرایط بهینه برای تولید آنزیم بتاگلوکوزیداز در محیط کشت, دمای 28 درجه سانتی گراد, CMC=5, pH به عنوان منبع کربن, لاکتوز به عنوان القا کننده و روز هفتم کشت میباشد. این شرایط بهنیه جهت تولید آنزیم بتاگلوکوزیداز در 30 جدایه تریکودرما مورد استفاده قرار گرفت و مقایسه نتایج بدست آمده نشان داد که جدایه T.reesei (PTCC5142) دارای بیشترین فعالیت ویژه آنزیمی (0.45U/mg) می باشد. همچنین جهت شناسایی ژن کد کننده آنزیم بتاگلوکزیداز استخراج DNA ژنومی به روش CTAB صورت گرفت. این قطعه از ژن بتاگلوکوزیداز با استفاده از دو آغازگر اختصاصی (CP11, CP12) و با طول قطعه مورد انتظار (566 جفت باز) تکثیر شد. الگوی هضم آنزیمی توسط آنزیم برشی PstI قطعه مذکور را تایید نمود.