ساخت ناقل بیانی حاوی ژن VP1 ویروس تب برفکی سویه (O (FMDV type O/IRN/1/2007، تایید پروتئین تولید شده در سلول های کلیه بچه هامستر (BHKT7) و ارزیابی پاسخ ایمنی در مدل موشی

هدف: هدف ساخت ناقل بیانی حاوی ژن VP1 ویروس تب برفکی سویه O جداسازی شده در ایران, بیان پروتئین و ارزیابی پاسخ های ایمنی در موش است.مواد و روش ها: سویه ویروس تب برفکی O از گوساله ای در شهر ری در سال 1386 جداسازی, سروتایپ و ژن VP1 این ویروس در ناقل PTZ57R/T و ناقل بیانی pcDNA3.1+ الحاق شد. برای بررسی بیان پروتئین, ژن VP1 بدون کدون خاتمه در ناقل pEGFP-N1 بالادست ژن GFP کلون شد. ناقل های pEGFP-N1-VP1 و pcDNA3.1+-VP1 در رده سلولی کلیه بچه هامستر ترانسفکت و بیان پروتئین الحاقی GFP-VP1 با میکروسکوپ معکوس فلوئورسنت و بیان پروتئینVP1 به روش الکتروفورز عمودی پروتئین ها و لکه گذاری وسترن تایید شد. ناقل بیانی pcDNA3.1+-VP1 به عنوان DNA واکسن به موش ها تلقیح و پاسخ آنتی سرم خنثی کننده (SNT) و قدرت تکثیر لنفوسیت های (SI) T در این حیوانات اندازه گیری شد.نتایج: هضم آنزیمی ناقل های کلون شده با ژن VP1, ورود این ژن در سه ناقل را تایید و بیان پروتئین VP1 در ناقل بیانی pcDNA3.1+ به روش لکه گذاری وسترن با مشاهده باند اختصاصی پروتئین هدف کاملا تایید شد. وجود لکه های سبز نیز بیان پروتئین الحاقی VP1-GFP را تایید نمود. مقادیر SNT و SI در گروه موش های تلقیح شده با DNA واکسن نسبت به گروه های کنترل دارای افزایش معنی داری بود.نتیجه گیری: این ژن با موفقیت تکثیر, کلون و بیان شد. با توجه به تایید بیان پروتئین VP1 و افزایش معنی دار SNT و SI از ناقل pcDNA3.1+-VP1 به عنوان DNA واکسن استفاده شد و پاسخ های ایمنی در مدل موشی ارزیابی شد.