انتقال ژن ترکیبی زیرواحد B سم وبا- پروانسولین انسانی به قارچ صدفی (Pleurotus ostreatus) و ارزیابی حضور و بیان آن

دیابت بیماری ای است که در اثر آن بدن نمی تواند انسولین تولید و یا به طور موثر از آن استفاده کند. اگرچه انسولین نوترکیب به طور تجاری در باکتری و یا مخمر تولید می شود, ولی نیاز به توسعه سیستم های جایگزین برای تولید انسولین وجود دارد. در این راستا قارچ خوراکی صدفی به عنوان میزبان برای تولید انسولین مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور ناقل دوتایی pcambCTB-Pins حاوی زیر واحد B سم وبا که به ژن پروانسولین انسانی الحاق شده بود, تحت کنترل پیش برنده gpd ساخته شد و با استفاده از روش انتقال ژن مبتنی بر اگروباکتریوم (سویه GV3101 با غلظت 0.8 (OD600nm)) در دمای هم کشتی 25oC و محیط گزینشگر حاوی هیگرومایسین و سفوتاکسیم به بافت ژیل قارچ صدفی (Pleurotus ostreatus) جدایه ایرانی (Iran1649c) منتقل شد. پس از تائید اولیه قارچ های تراریخت با استفاده از آزمون PCR با آغازگرهای اختصاصی, درج پایدار ژن ترکیبی پروانسولین انسانی و زیر واحد B سم وبا (CTB) در ژنوم قارچ صدفی با آزمون لکه گذاری سادرن تایید شد. هم چنین بیان این ژن ترکیبی در سطح رونویسی و پروتئین با روش هایی نظیر RT-PCR, الایزا و ایمونوبلاتینگ مورد تائید واقع شد و در میسلیوم قارچ های تراریخت میزان پروتئین ترکیبی CTB و پروانسولین انسانی 0.04 درصد پروتئین محلول کل بهدست آمد. با توجه به نتایج این تحقیق و بیان موفق ژن های خارجی در قارچ تراریخت, می توان به توسعه و تولید داروهای زیستی در قارچ های خوراکی امیدوار بود.