پژوهشگران: بیتا شهنواز  و ریحانه عزیزی
 

اهداف جلسه:
·آشنایی با مقدمه تجربی
·آشنایی با دستگاه ­ها و مواد لازم برای انجام آزمایش
·آشنایی با نانو کردن ژل رویال
·آشنایی با آماده کردن بره موم
·آشنایی با آماده کردن دارو
·آشنایی با تست دارو روی موش
·آشنایی با نحوه ارزیابی زخم

وسایل مورد نیاز: 
·کامپیوتر مجهز به اینترنت

مقدمه
در این فصل در زمینه آماده­سازی دارو، برخی ویژگی­های فیزیکی و شیمیایی آن، دستگاه­ها و مواد مورد نیاز برای آزمایش و همچنین آماده­سازی محلول اولیه جهت انجام آزمایش­های مربوطه و روش انجام آزمایش­ها، به تفصیل توضیحاتی ارائه می­گردد.

7-1 مقدمه تجربی
التیام یا بهبود زخم یک فرآیند بهبودی است که به دنبال ضایعه پوست و سایر نسوج ایجاد می­ شود. پوست، وسیع­ ترین عضو بدن است و سد اصلی فیزیکی بین موجود و محیط اطراف آن محسوب می ­شود. در تحقیق حاضر، مطالعه تولید داروی گیاهی توسط ژل رویال نانو و غیر نانو همراه با کیتوسان و بره موم بر روی بهبود زخم ­ها انجام شده است. از آنجا ژل رویال نانو غیر نانو همراه با کیتوسان و بره موم که به طبیعت به وفور یافت می­شود و هم چنین سازگار با محیط زیست می باشد، این مواد می­ تواند روشی مناسب برای تولید داروی گیاهی باشد. در این فصل در زمینه آماده­ سازی دارو، برخی ویژگی­ های فیزیکی و شیمیایی آن، دستگاه­ ها و مواد مورد نیاز برای آزمایش و هم چنین آماده ­سازی محلول اولیه جهت انجام آزمایش ­های مربوطه و روش انجام آزمایش ­ها، به تفصیل توضیحاتی ارائه می ­گردد.
7-2 دستگاه­ ها و مواد لازم برای انجام آزمایش
در تحقیق حاضر از دستگاه­های میکروسکوپ الکترونی روبشی ساخت کشور ژاپن A420 و خشک کن انجمادی استفاده شده است.
میکروسکوپ الکترونی روبشی یا SEM که در این پژوهش از آن استفاده شده است، نوعی میکروسکوپ الکترونی است که قابلیت عکس‌برداری از سطوح با بزرگنمایی ۱۰ تا ۵۰۰۰۰۰ برابر با قدرت تفکیکی کمتر از ۱ تا ۲۰ نانومتر را دارد. میکروسکوپ الکترونی روبشی یکی از بهترین روش های آنالیزی است که امروزه در حوزه های مختلف از جمله فناوری نانو کاربردهای فراوانی دارد. این میکروسکوپ، امکان بررسی و آنالیز شیمیایی، ترکیب، خصوصیات سطح و ریزساختار داخلی را در ابعاد میکرونی و نانومتری فراهم آورده است.
هم چنین دستگاه فریز درایر برای خارج ساختن حلال/ حلال های از ساختمان پلیمرها و خشک کردن نمونه ها بواسطه ایجاد خلا در دماهای بسیار پائین  بدون تغییر ساختار ترکیب استفاده می شود. همچنین، گستره دمایی دستگاه از حدود 40- درجه سانتی گراد تا 58- درجه سانتی گراد می باشد. فرآیند خارج کردن رطوبت از نمونه یا قطعه  منجمد شده به وسیله ایجاد خلاء را Lyophilization یا Freeze Drying  گویند. در فرآیند خشک کردن انجمادی، آب منجمد شده موجود در قطعه به وسیله فرایند تصعید از نمونه خارج می شود. یخ تصعید شده توسط پمپ خلاء یا انژکتور بخار، از داخل اتاقک خشک کن مکیده می شود. گرمای مورد نیاز برای تصعید از طریق هدایت یا تشعشع، تامین می گردد.
روش مورد استفاده در این تحقیق روش سل ژل می­باشد. مواد شیمیایی و وسایل مورد استفاده، بشر، هیتر، همزمن مغناطیسی، اتانول (الکل)، آب مقطر، اسید استیک، ژل رویال، بره موم، کیتوسان می­ باشد.
7-3 مراحل انجام آزمایش
الف: نانو کردن ژل رویال
در این پروژه از روش سل ژل برای نانو کردن ژل رویال در سه روش استفاده شده است. 
همان طور که می دانید ژله رویال مانند یک ماده محرک عمومی عمل می نماید و واکنش ایمنی و وظایف کلی بدن را بهبود می بخشد. با توجه به اینکه ژله رویال باعث بهبود سیستم دفاعی بدن، کاهش استرس و بیخوابی می شود، می تواند از پیری زودرس جلوگیری نماید و به زیبایی و جوانی پوست کمک نماید.
در روش اول ابتدا ژل رویال را با اتانول مخلوط کرده سپس ماده را بر روی هیتر (گرم­کن) قرار داده تا ژل رویال به خوبی در اتانول حل شده و اتانول تبخیر و به ماده­ی پودری تبدیل شود، کیتوسان را نیز در آب مقطر حل کرده و دو ماده را با هم مخلوط و در مجاورت با یخ خشک می­ شود. 
روش دوم 5 گرم کیتوسان وزن شده را با 20 میلی­لیتر محلول اسید استیک (2 درصد) که حلال کیتوسان است ترکیب کرده و بعد از 4 ساعت هم زدن 5 گرم ژل رویال به آن اضافه کرده مجددا 2 ساعت هم زده، ژل رویال آماده شده توسط خشک­کن انجمادی آبگیری شده است.
در روش سوم ژل رویال را بدون هیچ ماده­ی دیگری خشک کرده، و در نهایت هر سه ماده را با میکروسکوپ الکترونی روبشی تست کرده­ایم تا میزان قرارگیری ذرات ژل رویال را در ساختمان مولکولی کیتوسان بررسی کنیم.
ب: آماده کردن بره موم
بره موم حاوی حدود 50 درصد صمغ یا رزین گیاهان، 30 درصد موم 10 درصد اسیدهای چرب ضروری، 5 درصد گرد گل و 5 درصد دیگر آن از ترکیبات آلی، ویتامینها و عناص معدنی مانند: نقره، سدیم، جیوه، مس، منگنز، آهن، کلسیم، وانادیم و سیلیس است. 
این ماده خارق العاده خواصی شامل اثر ضد باکتریایی، ضد قارچی، ضد انگلی، آنتی اکسیدانی، ضد التهابی، ضد پوسیدگی دندان دارد، همچنین به عنوان تقویت کننده سیستم ایمنی بدن، بهبود دهنده اختلالات دهان و لثه، بی حس کننده موضعی، کاهش دهنده فشار خون کاربرد دارد. 
به اندازه یک گرم بره موم در 5 میلی­لیتر آب حل شده و روی همزن مغناطیسی به همراه گرما تا دمای 30 درجه گرم شده و هم زده شده تا به طور کامل بره موم باز شود.

پ: آماده کردن دارو
بره موم و نانو ژل رویال و کیتوسان را با هم مخلوط شده است تا ماده­ای رقیق­تر از کرم به دست آید. حال نانو دارو آماده شده روی موش مورد بررسی قرار می­ گیرد.
7-4 تست دارو روی موش
حیوانات آزمایشگاهی به عنوان مهمترین ابزار در جهت آگاهی یافتن از مجهولات علوم بیومدیكال سهم بسزائی دارند, زیرا از نظر اخلاقی ما نمی توانیم روش های نوین جراحی، آزمایش های دارویی، فراورده های بیولوژیك، آرایشی و بهداشتی را بر روی انسان انجام دهیم. در این راستا تحقیقات خوب و مطمئن مرهون حیوانات سالم از نظر جسمی و روحی می باشند و می بایست به بیماری های مشترك انسان و دام وسلامتی كاركنان توجه ویژه ای نمود. امروزه مصرف حیوانات آزمایشگاهی بعنوان شاخص در مقایسه امور پژوهشی كشورها با یكدیگر انجام می گیرد.
موش های سوری در سطح بسیار وسیعی جهت تحقیقات ویروس شناسی استفاده می شوند زیرا نسبت به بسیاری از ویروس ها حساسیت دارند و این حساسیت بخصوص در موش های نوزاد چشمگیرتر است. طول عمر نسبتاً کوتاه، این حیوانات را برای تحقیقات مربوط به روند پیری مناسب نموده است. همچنین در آزمایشات فارماکولوژی و رادیوبیولوژی و توکسیکولوژی استفاده می شوند. 
تعداد 4 موش سوری و جنس نر انتخاب و به طور تصادفی به دو گروه با دارو و بدون دارو تقسیم می­شوند. از هر گروه یک موش به عنوان شاهد انتخاب شد و 2 موش با خراش کوچک در سطح تقریبی 5 میلی­متر مربع و 2 موش با زخم بزرگ با سطح تقریبی 3 میلی­متر مربع بود.
برای آماده ­سازی موش ­ها را با اتر بیهوش کرده سپس موی آن ­ها را در قسمت وسط کمر تراشیده و با کمک خط­ کش شابلون زخم بزرگی با استفاده از تیغ اسکالپل و تیغ جراحی ایجاد شد. سپس به موش گروه با دارو، دارو را زده شده است، موش­ ها را در قفس گذاشته و مشاهده­ ها ثبت شدند.

7-5 نحوه ارزیابی زخم
هر دو روز طول زخم با خط­کش با دقت یک میلی­متر اندازه­گیری می­شد. درصد بهبودی زخم در گروه­های مختلف ارزیابی شد. درصد بهبودی زخم هر دو روز یک بار تا بهبودی کامل با فرمول زیر انجام شد.
تکلیف1: با توجه به مطالب ارائه شده در این درس در مورد نانو کردن ژل رویال و بره موم تحقیق و بررسی نمایید. سپس مطالب خود را دسته بندی کنید.
تکلیف2: بعد از مطالعه این درس و پیشبرد پروژه خود نتایج حاصل از آزمایشات و بررسی های خود را همراه با تصویر برای ما ارسال نمایید.
محل بازدید/ اردو/ خرید: _________

منابع مطالعه: برای کسب اطلاعات بیش تر در زمینه مطالب مرتبط این درس کتاب "نانو تکنولوژی به زبان ساده" را مطالعه نمایید.

 
تنظیم: الهام گارسچی - زینب شاه مرادی
التیام یا بهبود زخم یک فرآیند بهبودی است که به دنبال ضایعه پوست و سایر نسوج ایجاد می شود.