일차시험은 몇 개의 다른 원인의 가능성에 대한 최종 반응 결과를 나타내며 이에 대한 추가시험을 고려해야한다. 사망이 이차적인 변화에 의해 관찰이 불가능 했을 수도 있고 자연발생적 영향은 약물투여나 다른 종류의 영향과 관련해서 판단한다. 추가시험에서는 약물투여 후 변화와 자연발생적 변화를 구별하기 우해 용량반응 관계를 확인해야 한다.
일차시험 및 추가시험 : 정도의 차이는 있으나 모든 일차시험(기준에 근거한 시험)은 그 성질상 집약된 최종 반응결과를 나타낸 것이다. 즉 어느 하나의 지표에서 보인 영향에는 몇 개의 다른 원인이 있을 수 있다. 예로서출생시 한배새끼수 감소의 원인은 배란율(황체수)의 감소, 착상전 흡수의 증가, 착상 후 흡수의 증가 또는 출생 직후의 사망증가가 원인일 수 있다.또한 이러한 사망은 초기에 유발된 기형에 기인할 수 있으며, 이러한 기형은 그 후에 따르는 이차적인 변화에 의해 관찰할 수 없게 되었을 수도 있다. 특히 대조군에서 낮은 빈도로 발생하는 자연발생적 영향에 대해서는,약물투여에 의한 것과 자연적으로 발생하는 것의 구별은 다른 종류의 영향과 연관성을 고려하여 판단한다. 독성물질은 보통 한가지 이상의 영향을 용량의존적으로 유발한다. 예를 들면, 태자사망의 증가와 경도의 형태적변화의 발생률 증가는 기형 유발과 거의 일정하게 연관이 있다. 어떤 지표에 대한 영향이 밝혀지면, 그와 연관된 항목에 대하여 추가시험을 고려하지 않으면 안된다. 즉, 그 물질의 독성의 본질, 범위 및 기원을 명확히 밝혀야 한다. 추가시험에서는 사람의 위험성 평가에 이용되는 용량반응관계를 확인하여야 한다. 이것은 일차시험에서 투여에 의한 변화와 자연발생적 변화를 구별하기 위해 용량의존성 여부를 조사하는 것과는 다르다