비열등성 평가의 1차 변수, 미리 정해진 비열등성 한계, 비교시험의 전체 피험자수 선택의 타당한 근거가 필요하다. 비열등성 기준의 엄격성을 위해 평가변수의 임상적 적절성, 예방되고 있는 질병의 중증도, 표적군의 취약성을 고려하며, 해당 기준은 환경에 따라 다를 수 있다. 비열등성 한계설정시 면역원성 감소 가능성을 고려해야 한다.
비열등성 평가의 1차 변수, 미리 정해진 비열등성 한계, 비교시험의 전체 피험자수 선택의 타당한 이유를 신중히 밝혀야 한다. 비열등성 기준의 엄격성과 관련해 고려해야 할 요소는 평가변수의 임상적 적절성, 예방되고 있는 질병의 중증도, 표적군의 취약성이다. 특히 취약한 시험군을 대상으로 하거나, 혈청학적 평가변수가 질병 방어와 상관관계가 많은 것으로 알려져 있다면, 중증질환이나 쇠약성 질환에 대해 더 엄격한 한계(limit)를 입증할 수 있다. 새로운 백신이 안전성이나 접종률 개선면에서 상당한 편익을 주는 것으로 알려져 있다면, 덜 보수적인 한계를 고려할 수 있다. 비열등성 기준은 시험의 검체크기에 영향을 줄 것이므로, 타당성을 고려해야 할 수도 있다. 그러므로 다른 환경에서는 동일항원에 대해 다른 기준을 두는 게 적절할 수도 있다. 비열등성 한계를 설정할 때에는 순차적인 비교시험과 함께 시간이 흐르면서 면역원성이 감소되는 가능성도 고려해야 한다. 이러한 경우, 그 결과는새로운 백신이 원래 허가된 백신에 비해 면역원성이 상당히 떨어질 수 있다는 것이다. 하지만 공동체 내에서 병원체 순환이 줄어든 뒤 자연적인 면역력의 상승이 없듯이, 백신의 면역성이 실제보다 낮게 평가될 수 있음을 염두에 두어야 한다