후보소재 처리 24시간 후 lysis buffer를 가하여 시료를 얻고, 분리하는 과정을 거쳐 1,2차 항체를 붙인다. 항원-항체 결합도 확인할 수 있다.
후보소재 처리 24시간 후 lysis buffer (50mM Tris-HCl pH 8.0, 5mM EDTA, 150mM NaCl, 0.5mM PMSF, 0.5mM DTT)를 가하여 4℃에서 30분 동안 sonication을 실시하여 시료를 얻는다. 시료는 SDS-PAGE를 이용하여 분리한 다음, polyvinylidene fluoride membrane으로 transfer 한다. Membrane에 특이적 1차 항체를 붙인 후 horseradish peroxidase-conjugated 2차 항체를 붙인다. 항원-항체 결합은 chemiluminescence kits을 통해 확인한다.