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[Efecto del nervio vago en el atrio de conejo aislado en el bloqueo ganglionario debido al hexametonio]. Mediante la estimulación cuantitativa de los nervios vagos de la atria conejita aislada se obtuvieron relaciones de frecuencia-respuesta tanto para el efecto electrotrópico (reducción de la área del potencial de acción monofásica) como para la respuesta inotrópica. La adición de hexametonio en una concentración final de 10(-5) g/ml resultó en una disminución de la eficacia vagal en el rango de frecuencias inferiores y medias de estimulación, y se relacionó con un cambio de la frecuencia-respuesta característica hacia la derecha. En frecuencias más altas se incrementó la eficacia vagal. A diferencia del efecto inhibidor del hexamethonium, la acción facilitadora es irreversible. Al elevar la concentración hasta 4-10(-5) g/ml los efectos vagales se redujeron en gran medida, y la dependencia de la frecuencia de la respuesta se abolió en frecuencias medias. En el rango de 20 sec(-1) a 100 sec(-1) esta dependencia se estableció de nuevo y puede considerarse como parte de una relación de frecuencia-respuesta normal extremadamente desplazada hacia la derecha. Los cursos de tiempo de ambos tipos de efecto se caracterizan por un aumento brusco y una decadencia de la respuesta durante el período de estimulación. Un manejo matemático de las características de respuesta de frecuencia proporciona evidencia cuantitativa del grado de bloqueo hexametonio de las células ganglionares vagales en el atrio; además, conduce a la concepción de estas células para actuar como un sistema de distribución para una innervación homogénea por una divergencia generalizada de fibras postganglionares.
Estudios de relajación química en el sistema hepático alcohólico deshidrogenasa, NADH e imidazol. Hace varios años, Theorell y Czerlinski realizaron experimentos sobre el sistema de deshidrogenasa alcohólica del hígado de caballo, reducido nicotinamida adenina dinucleotide e imidazol, utilizando la primera versión del aparato de salto de temperatura con detección de cambios en la fluorescencia. Estos primeros experimentos se repetieron con mejor instrumentación y confirmaron los experimentos tempranos en términos generales. Sin embargo, el sistema de detección mejorado permitió medir una ligera dependencia de concentración del tiempo de relajación de alrededor de 3 ms. Además, el tiempo de relajación química fue menor que el determinado anteriormente (por factor 2). Los datos se evaluaron mucho más rigurosamente que antes, permitiendo una adecuada interpretación de los resultados. El tiempo de relajación observado se debe en gran parte a las constantes de tasa en una interconversión de complejos ternarios, que son más rápidas que tres (de los cuatro) constantes de tasa de disociación, determinadas previamente por Theorell y McKinley-McKee.1,2 Este hecho contribuyó a las dificultades anteriores de encontrar cualquier dependencia de concentración. Sin embargo, la unión del imidazol al complejo enzima-coenzima binario se puede hacer para parear cinéticamente en la tasa de interconversión de los dos complejos ternarios. La señal observada deriva en gran parte del complejo ternario(es). Un cambio sustancial en la señal de fluorescencia está asociado con el proceso de relajación observado, lo que sugiere un desplazamiento del imidazol en referencia a la masa de nicotinamida de la coenzima vinculada. Se consideran nueve modelos con dos tipos de acoplamiento de pre-equilibrios (no todos). Las evaluaciones cuantitativas favorecen el modelo con dos complejos ternarios conectados por una interconversión fuera del ciclo de cuatro pasos (bimolecular). El complejo ternario fuera del ciclo tiene un rendimiento de fluorescencia mucho mayor que el de dentro. El equilibrio de interconversión es cercano a la unidad de imidazol. Si se desplazaría mucho al lado del complejo "dead-end" (como en isobutyramide?! ), la acción estimulante no pudo ocurrir.
Estudio comparativo de infecciones virológicas en niños asmáticos y no asmáticos. El autor muestra análisis complejos: análisis clínicos, de laboratorio, rayos X, pruebas broncoscópicas, bronchográficas y de medición de la función pulmonar, así como los exámenes serológicos en el suero de sangre de ambos grupos de niños asmáticos y no asmáticos con infección virológica. El cálculo de diferencias estadísticamente significativas entre los diferentes resultados diagnósticos de ambos grupos ha confirmado que en los niños asmáticos la infección virológica del tracto respiratorio, los hallazgos patológicos en las pruebas de rayos X y la función pulmonar, la bronquiectasis y la invasión bacteriológica secundaria ocurren estadísticamente significativamente más a menudo que en los niños no asmáticos.
Múltiples formas de alfa-toxina estafilocócica. Un grupo de proteínas se extrajo fácilmente a la neutralidad de los precipitados de ácido tricloroacético de los supernatantes filtrados de la cultura estafilocócica, mientras que la alfa-toxina se disolvió y se activó tratando el precipitado con urea de 8 M, con tampones ácidos o calentando a 90-100 grados C a la neutralidad. La activación térmica del precipitado produjo una alfa-toxina relativamente pura con un peso molecular de 39.000. alfa-toxina fue elutada junto con otras tres proteínas en la cromatografía de apatita hidroxilo, y se obtuvo evidencia de una asociación entre las cuatro proteínas. En el enfoque isoeléctrico se obtuvo una fracción hemolítica a pH 6.2, probablemente debido a la activación ácida del precipitado formado en el extremo catódico de la columna. Las fracciones alfa-hemolíticas con pI de 7,4 y 8,6 se mostraron consistentes en alfa-toxina sólo cuando se analizaron por electroforesis de acrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio. El componente hemolítico con un pI de 9,2 contenía dos componentes adicionales de pesos moleculares de 27,500 y 18,000. La cromatografía de este material en Sephadex G-200 mostró que la alfa-toxina y las dos proteínas aparecieron como un complejo molecular alto.
Otitis media aguda. Un estudio bacteriológico y serológico clínico de niños con episodios frecuentes de otitis media aguda. Se estudió una serie de episodios de otitis media aguda con referencia a los hallazgos bacterianos y respuestas serológicas específicas en 48 niños con historias de episodios frecuentes antes. D. pneumoniae y H. influenzae fueron los patógenos más frecuentemente aislados. Los re-isolamientos después de la terapia a menudo se hicieron en episodios con curación lenta o fracaso terapéutico. La mayoría de los niños contenían patógenos en la nariz, incluso cuando no tenían signos de infecciones del tracto respiratorio. Se observaron recaídas homológicas en pocos casos y nunca con neumococos tipo 3 y sólo una vez con H. influenzae tipo b. Las respuestas serológicas específicas se demostraron generalmente en niños mayores de 2 años de edad. D. pneumococcus tipo 3 y H. influenzae tipo b generalmente provocaron una respuesta de anticuerpos. No se encontraron niveles que indiquen deficiencias de inmunoglobulina en los niños.
Endosimbio y tolerancia celular en el coral hawaiano Sarcothelia edmondsoni verrill. La relación entre el coral blando Sarcothelia edmondsoni Verrill y sus algas simbióticas se considera como un primer caso de tolerancia celular que puede ser perturbada por una variedad de condiciones adversas. Las células de algas se encuentran en vesículas profundas dentro de las células endodérmicas del anfitrión y no están sujetas a digestión. Su expulsión parece ser una translocación inversa al extremo distal de la célula anfitriona y escape por una forma de fagocitosis inversa que se asemeja a la secreción. Los mecanismos celulares involucrados no están claros.
Investigaciones epidemiológicas de la epidemia de encefalitis venezolana de 1969 en Ecuador. Una epidemia de encefalitis equina venezolana (VEE), subtipo I variante B, ocurrió en Ecuador durante la temporada lluviosa y caliente de 1969. En este artículo, se da una descripción general de la epidemia y se reportan aislamientos de virus de humanos. Se realizó una encuesta serológica para determinar la extensión de la epidemia a lo largo de la zona costera del país. No está claro si la tasa de anticuerpos más alta en las personas mayores fue porque estaban en mayor riesgo de infección o fue el resultado de una inmunidad acumulada con el tiempo. Este último podría ser una indicación de actividad viral endémica, aún no probada para la variante del virus VEE IB. Se realizaron vigilancia de mosquitos y intentos de control por pulverización aérea.
Malformaciones congénitas del sistema nervioso central producidas por analgésicos narcóticos en el hamster. Datos de respuesta teratogénica fetal se obtuvieron para una variedad de compuestos narcóticos y relacionados por inyección subcutánea única de los fármacos en hamsters embarazadas durante los períodos críticos de la organogénesis del sistema nervioso central. El número de fetos anormales de hembras inyectadas con diacetilmorfina (heroína), thebaine, fenazocina, pentazocina, propoxifeno y metadona aumentó a medida que la dosis materna de los compuestos se incrementó. Por el contrario, la morfina, la hidromorfona y la meperidina produjeron un aumento en el número (por ciento) de anomalías fetales sólo hasta un cierto nivel de dosis materna. Los aumentos adicionales en los niveles de la dosis materna no produjeron anomalías fetales adicionales. Estudios comparativos de dosis maternas únicas y múltiples indicaron que la diacetilmorfina (heroína) y metadona produjeron un aumento de cuatro a seis veces en las anomalías fetales con dosis repetitivas, mientras que el porcentaje de fetos malformados permaneció el mismo con la hidromorfona (Dilaudid). Los antagonistas narcóticos nalorfina, naloxona, levallofano y ciclazocina bloquearon los efectos teratogénicos de dos dosis únicas y múltiples de los narcóticos.
Evaluación de un método de screening visual no profesional. Un método de screening diseñado para la administración por el personal laico se evalúa y compara con los resultados de screening de la Técnica Clínica Modificada para un screening de 1600 niños de escuela primaria.
Requisitos iónicos del transporte de sodio tubular proximal. Los iones de hidrógeno. Se usó la perfusión simultánea a los tubos convolutos proximales y capilares peritubulares para estudiar los efectos de diferentes fluidos de perfusión en la reabsorción de sodio y la secreción de hidrógeno, que se calculó como la reabsorción de bicarbonato y ácido titratable. Los resultados muestran que la reabsorción de sodio no estaba estrechamente ligada a la secreción de hidrógeno. El bicarbonato estimula tanto la reabsorción de sodio como la secreción de hidrógeno, pero Tris sólo estimula la reabsorción de sodio. Imponer un gradiente de cloruro adverso a través del tubo proximal (C1- peritubular mayor que C1- luminal) disminuyó la reabsorción de sodio pero no disminuyó la secreción de hidrógeno. Diamox inhibía el transporte neto de sodio y hidrógeno. Se concluye que no existe una relación firme entre la reabsorción de sodio y la secreción de hidrógeno y que el bicarbonato probablemente estimula el transporte de sodio por una serie de mecanismos, incluyendo un efecto sobre el transporte de sodio no relacionado con su capacidad para aumentar la secreción de iones de hidrógeno.
ECS, pH intracelular y electrolitos del músculo cardíaco y esquelético. El espacio extracelular (ECS) del músculo de cada ventrículo del corazón (RV y LV), el atrio, el diafragma y el cuadricepto se estimó en el conejo anestesiado a partir de los volúmenes de distribución de [14C]insulina, [14C]sucrosis, [51CrEDTA, y C1--. Se medieron los electrolitos de tejido entero y se calcularon los electrolitos intracelulares. El ECS de los tejidos varió, aumentando en el orden de los cuadríceps menos que LV menos que RV menos que los atrios. El volumen de distribución de [14C]inulina siempre fue menor que el de [14C]sucrosis o [51Cr]EDTA que coincidieron estrechamente, mientras que el de C1-- siempre fue mayor. No hubo diferencia en la K+ intracelular en el músculo de cada una de las cámaras cardíacas, mientras que la Na+ intracelular y la C1-- variaron, aumentando en el orden de los cuadriceptos menos que LV menos que RV menos que los atrios. El pH intracelular, medido con [14C]DMO no difirió en ninguno de los tejidos estudiados. Se concluye que, in vivo, el estimado ECS del músculo incárdico es menor que el reportado in vitro, que [51Cr]EDTA es un marcador ECS satisfactorio, y que existen diferencias en Na+ e C1 intracelulares, pero no K+ o pH entre el músculo de las cámaras cardíacas.
pH intracelular y K+ del músculo cardiaco y esquelético en la acidosis y la alkalosis. Se han comparado los efectos de la acidosis metabólica y respiratoria y la alkalosis en el pH intracelular (pHi) y K+ en el músculo cardiaco y esquelético del conejo anestesiado. El espacio extracelular y el pHi se calcularon a partir de los volúmenes de distribución de [51Cr] EDTA y [14C]DMO, respectivamente. Cuando el pHe se modificó al alterar el PCO2, la inclinación de la línea que relaciona el pHi con el pH extracelular (pHe) era mayor (P menos de 0.05--0.001) que la obtenida durante los cambios metabólicos del pHe en los ventrículos derecho y izquierdo, atrios, diafragma y cuadricepto. Durante la acidosis metabólica y la alkalosis, la inclinación de la línea pHi/pHe no varía entre los tejidos. Durante la acidosis respiratoria, no hubo diferencia en la inclinación entre los tejidos cardíacos, pero fue menos en el ventrículo izquierdo que en el cuadricepto (P menos de 0,001). En el ventrículo izquierdo, la K+ intracelular aumentó en una acidosis metabólica (P menos de 0,05) o respiratoria (P menos de 0,02), mientras que en el diafragma disminuyó (P menos de 0,02). Intracelular K+ correlacionado con pHe y pHE-PHi. Los cambios en el pHi pero no en la K+ intracelular podrían explicar las diferencias conocidas en la función del miocardio en la acidosis respiratoria y metabólica.
Efectos de los neurohumores autónomos sobre los potenciales transmembranosos de las fibras del plateado atrial. Las fibras del plateado atrial canino aisladas fueron tratadas con acetilcolina o norepinefrina para notar los efectos sobre el potencial transmembráneo. La acetilcolina, 1.0 o 2.0 mug/ml, redujo consistentemente la inclinación de la depolarización inherente a la fase 4. Los aumentos en el potencial diastólico máximo y el aumento de la velocidad se produjeron junto con una disminución en el exceso. La fase del plató desapareció. El tratamiento previo con atropina, 1.0 mug/ml, evitó estas respuestas, y solo este medicamento no tuvo un efecto discernible. La norepinefrina aumentó constantemente la inclinación de la depolarización de la fase 4. A menudo, las fibras plateadas generaban potenciales de acción por el mecanismo normal del pacemaker. "Arritmias" caracterizadas por excitaciones espontáneas fueron inducidas en el 92% de los experimentos con norepinefrina. La norepinefrina también mejoró la fase del plateado del potencial de acción y disminuyó la velocidad creciente y el exceso. El propranolol racémico, 1.0 mug/ml, bloqueó todos los efectos anteriores, incluidas las arritmias. Dextropropranolol, 1.0 mug/ml, no bloqueó los efectos producidos por la norepinefrina. La acetilcolina, aplicada a las fibras durante el tratamiento con norepinefrina, redujo la inclinación de la despolarización de la fase 4 inducida por la norepinefrina y terminó con las arritmias inducidas.
Presión de fluido intersticial y secreción gástrica alcalina. La presión del fluido intersticial de la submucosa del fondo gástrico se monitorizó mediante las cápsulas de Guyton en perros anestesiados con pentobarbital. La presión intracapsular (ICP) se midió durante la secreción producida por: a) soluciones hipertónicas colocadas dentro del estómago; b) hipertensión arterial (200 mmHg) aplicada durante la infusión intra-arterial de histamina, y c) infusión intra-arterial de acetilcolina. El primer procedimiento no modificó el ICP. Por otro lado, cada vez que el líquido intersticial apareció en el lumen gástrico durante la hipertensión y la histamina, el ICP promedio aumentó, principalmente debido a la filtración capilar aumentada. El coeficiente hidráulico medido en estos experimentos era al menos 4 órdenes de magnitud más grande que el respectivo coeficiente osmótico. La acción de la acetilcolina fue compleja: grandes dosis ampliaron la filtración capilar neto, pero pequeñas dosis aumentaron el ICP promedio por estimulación muscular sólo. La contracción de la mucosa muscular puede ser el mecanismo más importante subyacente al flujo masivo de fluido intersticial en condiciones fisiológicas. Se concluye que los gradientes hidráulicos a través del epitelio podrían representar la "secreción" de jugo "alcalino".
Terapia de mantenimiento en psiquiatría: I. Esquizofrenia. La psiquiatría hospitalaria ha evolucionado de los programas de "tratamiento" a largo plazo que eran principalmente custodiales al tratamiento farmacológico exitoso de episodios psicóticos agudos. Desafortunadamente, muchos pacientes siguen regresando al hospital con recaídas. Este llamado síndrome de puerta giratoria llama la atención sobre la importancia crítica de prevenir así como tratar los episodios agudos. En la primera parte de esta revisión, el autor revisa la literatura clínica sobre el tratamiento profiláctico de la esquizofrenia con fármacos antipsicóticos de mantenimiento. La segunda parte revisará la literatura sobre el tratamiento profiláctico de los trastornos afectivos con litio y tricíclicos. En opinión del autor, estos fármacos ofrecen el potencial para la psiquiatría verdaderamente preventiva.
Pacientes hospitalizados y ambulatorios patrones de drogas psicotrópicas prescritas por médicos no psiquiátricos. Los autores encontraron que entre los 228 pacientes hospitalarios generales, los tranquilizantes menores fueron prescritos con la mayor frecuencia y con la menor justificación, y que los tranquilizantes principales fueron prescritos con moderación y en gran medida con discreción. Los antidepresivos se administraron con menos frecuencia de lo que justificaría la incidencia de enfermedad depresiva entre estos pacientes. El no reconocimiento de la depresión en pacientes con quejas somáticas y signos autónomos de depresión contribuyeron a esta falta de tratamiento.
[Acidosis metabólica como efecto secundario de la anestesia de metoxiflurano (traducción del autor)]. En 14 pacientes sometidos a cirugía con anestesia con metoxiflurano se observó el desarrollo de acidosis metabólica. Como mecanismos que causan dicha acidosis se discuten isquemia regional e inhibición del metabolismo del ácido láctico en el hígado por productos de descomposición de metoxiflurano.
Efecto protector de la hipotermia en la deficiencia cerebral de oxígeno causada por la hipoxia arterial. Para estudiar los efectos protectores cerebrales de la hipotermia en la hipoxia arterial, anestetizada (70% N2O), las ratas ventiladas mecánicamente fueron enfriadas a una temperatura corporal de 27 ° C. La hipoxia se indujo disminuyendo el contenido de oxígeno en la mezcla de gas inspirado al 6-7% o al 2,5-3%. Esto redujo el PaO2 promedio a alrededor de 25 y 11-12 torr, respectivamente. En PaO2 torr, no hubo cambios en el flujo sanguíneo cerebral (CBF), el consumo de oxígeno cerebral (CMRO2), o los metabolitos del tejido labilo. La ausencia de signos de hipoxia cerebral se podría atribuir a un efecto de la temperatura y el pH en la curva de disociación hemoglobina-oxígeno. Así, a 27 ° C con un PaO2 de 25 seco, el contenido total de oxígeno (TO2) de la sangre arterial permaneció superior a 15 ml (100 ml)-1, aproximadamente tres veces el valor obtenido en este PO2 en ratas normotérmicas. En PaO2 11-12 seco, el TO2 arterial se redujo a aproximadamente 5 ml (100 ml) (-1). La hipoxia no indujo ningún cambio en CMRO2, un triple aumento en CBF, una lactacidosis moderada en el tejido, y una pequeña disminución en el contenido de fosfocreatina, pero ningún cambio en ATP, ADP o AMP. Estos cambios son menos marcados que los que ocurren en el mismo TO2 arterial en ratas normotérmicas. Se concluye que la hipotermia ejerce un efecto protector pronunciado en el cerebro en la hipoxia hipóxica, y que están involucrados dos mecanismos. En primer lugar, ya que la hipotermia desplaza la curva de disociación de la oxihemoglobina hacia la izquierda, y previene o minimiza un desplazamiento hacia la derecha debido a la acidosis, mantiene un alto TO2 en la sangre arterial en un dado PaO2. En segundo lugar, al reducir la CMRO2, y por lo tanto presumiblemente también las necesidades de energía celular, la hipotermia ejerce un efecto protector a nivel celular.
Caracterización del herpesvirus de cabra. Se encontró que un virus, que fue aislado de los niños (Capra hircus) afectados por una infección generalizada relativamente grave, contenía ADN y tenía una densidad de 1.2820 g/cm3. El virus era sensible a la acción de los disolventes lipídicos y la tripsina y se inactivó rápidamente a pH 3.0 y a temperaturas de 50 y 56 ° C. El virion, un icosahedro compuesto por un nucleoide rodeado por una doble membrana, midió aproximadamente 135 nm en diámetro. En base a sus propiedades químicas y físicas, el virus es considerado un herpesvirus.
Transferencia de drogas a través de la pared ruminal en las cabras. Se medieron las tasas a las que se transferían pentobarbital, salicilato, antipirina y quinina del rumen de cabras intactas y conscientes. También se evaluaron las tasas a las que los mismos fármacos se difundieron del plasma sanguíneo (bajo condiciones de concentración constante de fármaco) en la solución ruminal. Estos compuestos se absorbieron por difusión simple, y las tasas de transferencia eran una función del pH de la solución intraruminal. La difusión de fármacos del plasma en el reticulorumen permitió que se establecieran distribuciones de estado estacionario en algunas cabras. Se compararon las distribuciones teóricas y observadas de estado estacionario. Hubo buenas correlaciones para el pentobarbital y la antipirina, pero no para el salicilato y la quinina. Estos hallazgos confirman in vivo los principios generales de transferencia de fármacos a través del epitelio ruminal que se derivaron de estudios previos realizados in vitro.
Preservación de la respuesta de presión pulmonar hipóxica en la neumonía pneumocócica canina. Para determinar el papel de la vasoconstricción pulmonar hipóxica en la neumonía neumocócica, se realizaron mediciones hemodinámicas en 16 perros antes y dentro de 36 horas después de la administración intrapulmonar de neumococos tipo III. Diez perros con uno o más lóbulos de neumonía aumentaron sus resistencias vasculares pulmonares y disminuyeron ligeramente sus tensiones arteriales de O2. La hipoxia aumentó y la hiperoxia disminuyó su resistencia vascular pulmonar. Durante la respiración de O2, el PO2 arterial fue menor durante que antes de la neumonía y aumentó cuando la perfusión pulmonar se desvió de los pulmones enfermos. En 2 perros que respiraban aire, forzar la salida cardíaca a través del pulmón enfermo causó un aumento en la resistencia vascular que podría reducirse claramente por la respiración de O2. En 5 perros, los recuentos de células mastales pulmonares no mostraron disminución en los lóbulos con neumonía. En la neumonía pneumocócica, el mecanismo de presión pulmonar hipóxica sirve para disminuir el flujo sanguíneo a los lóbulos enfermos y, por lo tanto, para mantener el PO2 arterial. Las células mastales pulmonares podrían participar en esta respuesta.
Valor de los análisis de gases sanguíneos capilares en la gestión de trastornos respiratorios agudos. Un estudio comparativo de los parámetros de gases sanguíneos y ácido-base, obtenido simultáneamente de muestras capilares arteriales y de los dedos, se realizó en 45 pacientes con dificultad respiratoria aguda sin shock circulatorio. Aunque se encontraron pequeñas y significativas diferencias entre los valores de pH de la muestra 2, Po2, Pco2 y bicarbonato, las correlaciones entre los 2 fueron mayores o iguales a 0,97 para cada variable. Se concluyó que aunque la sangre arterial es la muestra preferida para la evaluación de los gases sanguíneos y el estado ácido-base de los pacientes en dificultad respiratoria aguda, la sangre capilar parece ser un sustituto válido en el manejo de estos pacientes. Esta técnica es particularmente valiosa en la práctica pediátrica, donde las muestras arteriales repetidas se obtienen menos fácilmente.
Trasplante de médula ósea en el hombre. El trasplante de médula ósea está surgiendo como un enfoque terapéutico viable para una serie de enfermedades que generalmente o uniformemente son fatales. Revisamos aquí las experiencias recientes en el trasplante de médula ósea en humanos en la UCLA y en varias otras instituciones de todo el mundo. Examinamos el trasplante de médula en enfermedades de inmunodeficiencia, leucemia aguda y anemia aplásica y consideramos los problemas de infección en los receptores del trasplante. También se han informado de las aplicaciones de la tipografía de tejidos para el trasplante de médula espinal y las manipulaciones inmunológicas, que pueden influir en el engranaje y la enfermedad de trasplante versus hospedador.
La hipótesis del virus en el lupus eritematoso sistémico. Los virus del tipo C son actualmente los principales candidatos etiológicos en el lupus eritematoso sistémico. Sobre la base de los conocimientos obtenidos de los estudios de modelos experimentales y humanos de la enfermedad viral crónica, existen posibles roles patogenéticos de un virus en el lupus eritematoso sistémico. Los intentos experimentales de implicar virus específicos han sido predominantemente negativos, pero se han reportado recientemente evidencias de expresión aumentada del virus tipo C.
El transporte de la membrana del ácido ascórbico. Un sistema para medir la tasa de transporte del deshidroascorbato a los glóbulos rojos humanos muestra la cinética del tipo Michaelis-Menten con inhibición del substrato a niveles superiores a 150 muM de DHA. La adición de azúcares perjudica este transporte en la jerarquía decreciente D-glucosa, D-mannosa, D-xilosa, D-galactosa, L-licosa, D-araboascorbato, L-sorbosa y 2-deoxy-D-ribosa. El efecto de la glucosa en el transporte del ascorbato se marca a niveles fisiológicos. El transporte de DHA es acelerado por los iones de cobre y permite que el deshidroascorbato se mueva contra un gradiente de concentración. La evidencia apoya las hipótesis que proponen que la hiperglucemia afectará la disponibilidad intracelular de la vitamina C.
Alteraciones carcinofetales en la glucosamina-6-fosfato sintetasa. Los niveles de glucosamina-6-fosfato sintetasa en varios tejidos de ratón, incluyendo aquellos que se encuentran en proceso de diferenciación o regeneración, revelaron que la enzima está relacionada con la proliferación y diferenciación de tejidos. En el hígado tras la transformación neoplásica, el nivel de glucosamina 6-fosfato sintetasa aumenta y la forma hepática de la enzima con un pI de 5,0 se sustituye por una forma con un pI de 4,1. Dado que esta última forma también se ha encontrado presente en embriones enteros (12 y 14 días) y cerebro, las alteraciones moleculares de la glucosamina-6-fosfato sintasa en la neoplasia hepática pueden considerarse carcinofetales.
Una fosfatasa alcalina asociada al hepatoma, la isoenzima de Kasahara, comparada con una de las isoenzimas de las células amnióticas de FL. Se encontró que un ALP asociado al hepatoma humano (fosfohidrolasa monoestérica ortofosfórica, E.C. 3.1.3.1) compartió movilidad electroforética, inactivación por urea, inhibición por fosfato inorgánico, etileno diaminetetraacetato, y aminoácidos (L-fenilalanina, L-leucina y L-homoarginina), estabilidad térmica, sensibilidad a la neuraminidasa, pH óptimo, valor de Km, y sitio de antígeno con isoenzimas ALP de movimiento rápido de cepas de células FL derivadas de la membrana amniótica humana. Sin embargo, la membrana amniótica fresca de 40 semanas carecía de esta isoenzima. En su lugar, tenía un tipo placental ALP que consistía en componentes menores. El otro isoenzima ALP de las células FL tenía propiedades comunes al hepatoma ALP en cuanto a sensibilidad a la L-fenilalanina, inhibición por etileno diaminetetraacetato, inactivación por urea y sitio de antígeno, pero se diferenciaba de él en movilidad electroforética, sensibilidad a la L-leucina y L-homoarginina, y la presencia de otro sitio de antígeno. Era más estable en calor y más sensible a la inhibición por fosfato inorgánico que Hepatoma AP. Se considera el posible mecanismo regulador entre el tipo hepatoma ALP y el tipo placental ALP en las células amnióticas.
La transpeptidasa gamma-glutamilo. Indicador sensible de lesión isquémica renal en animales experimentales y rechazo de homógrafos renales en humanos. Se revisan los lugares de lesión isquémica dentro del riñón y se examina el valor diagnóstico de las mediciones de plasma y enzimas urinarias en lesión isquémica renal y en rechazo de homotransplante renal en animales experimentales y humanos. La gamma-glutamyl transpeptidase (gamma-GT) es una enzima ubicada principalmente en la frontera del cepillo del tubulo convoluto proximal del riñón. Su localización única en las células más fácilmente dañadas por la isquemia y su facilidad de análisis proporcionan la razón para su uso en la medición y diagnóstico de lesiones renales isquémicas. La actividad de gamma-GT se midió en perros que sufrían periodos variables de isquemia renal y en condiciones de hipotermia renal local y se demostró que es un indicador sensible de lesión isquémica. Veinte pacientes consecutivos sometidos a homotransplante renal fueron estudiados por la estimación diaria de su actividad gamma-GT urinaria de 24 horas; se obtuvo una excelente correlación entre los niveles elevados de esta enzima y el diagnóstico clínico de rechazo del trasplante.
Influencia del pH en la inactivación térmica de la enterotoxina estafilocócica A determinada por la alimentación del mono y el ensayo serológico. Se investigó el efecto del pH en la inactivación térmica de la enterotoxina estafilocócica A. El análisis de la toxina calentada por inmunodifusión en gel indicó que la enterotoxina A en el caldo de carne de vacuno se inactivó más rápido a pH 5,3 que a pH 6,2. Los valores z (inclinaciones) para las curvas de inactivación térmica en pH 6.2 y 5.3 fueron 49,5 y 55 F (aproximadamente 27 y 30 C), respectivamente. La enterotoxina producida y calentada en el medio dializado y ensayada por la alimentación de monos fue más fácilmente inactivada por el calor a pH 5,3 que a pH 7,8. Las curvas de inactivación térmica para la enterotoxina A en el brote de carne de vacuno (5 mug/ml, pH 5,3) se determinaron por dos métodos, la alimentación de monos y el ensayo serológico. Los valores z para las curvas obtenidas por estos dos métodos fueron de 55 F, aunque la pérdida de actividad biológica o tóxica de la enterotoxina ocurrió antes de la pérdida de actividad serológica.
Sobrevivencia de salmonelas durante la fabricación de pepperoni. Se estudió la supervivencia de salmonelas en mezclas de carne de vacuno y cerdo artificialmente contaminadas (aproximadamente 10(4) salmonelas/g) en pepperoni preparados por fermentación de una flora natural o de una cultura láctea o en salchichas no fermentadas. Los pepperoni no se convirtieron en libres de salmonelas durante el habitual período comercial de secado de 15 a 30 días. Salmonella dublin estaba presente en todos los productos, fermentados o no fermentados, después de 42 a 43 días de secado. A un nivel más bajo de contaminación, 10(3)/g, S. dublin no pudo ser recuperado de pepperoni fermentado por la cultura de inicio después de 14 días de secado, pero persistió en la salsa fermentada por la flora natural. S. typhimurium (número inicial, 10(4)/g) estaba ausente después de 42 días de secado cuando la cultura de inicio se utilizó para fermentar los pepperoni, pero todavía estaba presente en los productos naturales de flora fermentada y no fermentada. S. dublin, anfitrión adaptado al ganado, o S. choleraesuis, anfitrión adaptado a cerdos, tenían patrones de supervivencia similares en carne de cerdo de carne de vacuno, o pepperoni de carne de cerdo. El calentamiento de la salmonella contaminada con pepperoni de carne de cerdo (después de la fermentación, pero antes de secar) a una temperatura interna de 60 ° C (inactivando las triquinas) eliminó el patógeno transmitido por los alimentos del producto de la salchicha.
Crecimiento de Staphylococcus y Salmonella en frankfurters con y sin nitrito de sodio. Los frankfurters convencionales y libres de nitritos en envases envueltos sueltamente se compararon en cuanto a su capacidad para apoyar el crecimiento de Salmonella, Staphylococcus, y su flora de esterilización natural en 7 ° C (simulando almacenamiento refrigerado) y 20 ° C (simulando posible abuso de temperatura). A 7 ° C, la salmonella no creció en ningún tipo de frankfurter; Staphylococcus y la flora de estruendo natural a veces crecieron más rápidamente en ausencia de nitrito, pero la diferencia no fue significativa. A 20 ° C, el crecimiento de Salmonella, Staphylococcus, y de la flora dañina fue, como máximo, sólo ligeramente más rápido en frankfurters libres de nitritos. Salmonella no fue suprimida en los experimentos de cultivo de brotes, el contenido de pH y nitrito encontrado en frankfurters. Aunque ambos tipos de frankfurter pueden convertirse en peligrosos debido al crecimiento de Salmonella o Staphylococcus, ningún peligro inusual o adicional resultó de la omisión de nitrito de frankfurter.
Caracterización de una dextranasa extracelular de Fusarium moniliforme. Una dextranasa extracelular (EC 3.2.1.11) se purificó aproximadamente 75 veces a partir de filtrados de cultura libre de células de Fusarium moniliforme. La dextranasa purificada era del tipo endo, y la isomaltosa se identificó como el producto final primario de la hidrólisis de dextran. El peso molecular de la dextranasa fue determinado a 39,000 por la cromatografía de permeabilidad de gel. La enzima era más activa a pH 5.5, y la temperatura óptima era cerca de 55 C. La actividad no fue inhibida por el ácido etilenediaminetracético o el iodoacetato. El Km para dextran con un peso molecular promedio de 10.000 se estimó en 1.1 X 10(-4) M. La movilidad electroforética de la dextranasa era distinta a la de una dextranasa comercial derivada de penicil. También se encontró que la F. moniliforme dextranasa se diferencia de la preparación comercial por su mayor actividad relativa contra los glucanos aislados de Streptococcus mutans.
Thiobacillus no autotrófico en agua de la mina ácida. Los tiobacilos no autotrópicos fueron aislados del agua ácida de una mina de carbón. Basándose en su fisiología mixotrófica, los isolatos se consideran cepas de Thiobacillus perometabolis.
Graft versus Reacción de huésped. Un estudio de ultraderecha. La reacción de trasplante versus huésped (GvH) después de las transfusiones de leucocitos ocurrió en un hombre de 34 años con linfosarcoma generalizado. Se realizaron estudios histológicos y ultrastructurales, con especial referencia a las células disqueratóticas dispersas en la epidermis. Estas células generalmente se consideran una característica constante e importante de la reacción de GvH. La agregación densa de tonofilamentos, incluidas las organelas citoplasmáticas y la pérdida de desmosomas, se observaron en las células dyskeratoticas. Se observaron varios desmosomas intracelulares con tonofilamentos unidos a su placa de adhesión. Algunas de estas células fueron capaces de llegar a la capa córnea; otras fueron fagocitadas por los queratinocitos vecinos. Estas células podrían ser el resultado de un daño tóxico a la epidermis, provocado por el fenómeno inmunológico implicado en la reacción GvH. Más tarde en el curso clínico, se produjeron formaciones de bulla, mostrando algunas características de la necrolisis epidermal tóxica (TEN), así como características de la reacción de GvH.
Síndrome nefrótico en niños indios. Un estudio clínico-patológico de 206 niños indios con síndrome nefrótico mostró una causa renal primaria en 195 (96%), de los cuales 77% eran niños. En 126 niños (96 niños, 30 niñas) el inicio del trastorno ocurrió antes de los 5 años de edad. La biopsia renal mostró lesiones mínimas en 150 pacientes (77%); en 85 de estos se realizó la biopsia 3 meses a 16 años después del inicio del síndrome nefrótico. Anomalías histológicas renales significativas en 45 casos fueron etiquetadas como mesangiocapilar 8, mesangioproliferativa 4, proliferativa con extensos crecientes 2, membranosa 3, glomerulosclerosis segmental focal 9, glomerulosclerosis global focal 2, avanzada no específica 8, y leve proliferativa 9. Las manifestaciones nefríticas se asociaron principalmente con lesiones renales significativas, que se encontraron con más frecuencia cuando el inicio de la enfermedad era después de los 5 años de edad. La depuración de la proteinuria con la terapia con corticosteroides se limitó prácticamente a pacientes con cambios histológicos renales mínimos o leves. Nuestros hallazgos sugieren que el patrón de síndrome nefrótico idiopático en niños indios es similar al reportado en países occidentales.
Separación de las desoxiribonucleases (DNases) de la capa corneal humana normal y las escalas psoriáticas por micro-electroforesis de discos. Se homogeneizaron las escalas psoriáticas y el córneo stratum normal y se realizó una centrifugación diferencial. La actividad DNase de las fracciones individuales se investigó por micro-diselectroforesis. A pH 5 sólo en el granulado de 600xg y el supernatante de 105.000xg de la actividad normal de la DNasa de la queratina se pudo observar. Sin embargo, todas las fracciones psoriáticas mostraron actividad enzimática distinta. A un pH de 7,4, poca actividad de la DNasa psoriática sólo podía ser demostrada en el supernatante de 105.000 xg. A excepción de la granula de 15.000xg, todas las fracciones de la capa normal de la córnea mostraron actividad marcada. Además, el supernatante de 105.000xg mostró dos bandas DNase diferentes.
Distribución subcelular de las fosfatases, proteinases y ribonucleases en la capa corneal humana normal y en las escalas psoriáticas. La distribución subcelular de las fosfatases, proteinases y ribonucleases de la capa corneal humana normal y de las escalas psoriáticas se determinó después de la centrifugación diferencial. Todas las enzimas psoriáticas mostraron una actividad mucho mayor en comparación con las enzimas normales del stratum corneum. Las más altas actividades de la fosfatasa alcalina de las escalas psoriáticas se pueden detectar en la fracción nuclear. La actividad principal de todas las otras fosfatases y proteinases probadas estaba presente en la fracción citoplasmática. La distribución subcelular de las ribonucleases varía según el valor de pH.
Una reinvestigación de los sitios de transcripción y traducción de la Euglena cloroplástica fenilalanil-tRNA sintetasa. Se realizó un intento para determinar los sitios de transcripción y traducción de la fenilalanil-tRNA de cloroplastos. Los inhibidores del ARN bacteriano y la síntesis de proteínas se añadieron a las culturas de fase logarítmica y estacionaria de Euglena gracilis tipo salvaje B. Las culturas de fase logarítmica eran sensibles a ambos tipos de inhibidores. En las culturas de fase estacionaria, la síntesis de plastidos fue reducida por el ARN, pero no por inhibidores de la síntesis de proteínas. También se observó el efecto de los antibióticos en la enzima mitocondrial. Se discuten varias posibles explicaciones de estos resultados.
Hipertermia en el conejo. Estudios sobre la influencia de la respiración con hipertermia exógena]. La temperatura rectal, la frecuencia respiratoria, el pH arterial y venoso y el pCO2 arterial y venoso se registraron a intervalos de 15-30 minutos en conejos de broiler hembra expuestos a una temperatura ambiental de 35 grados C, hasta que murieron. La frecuencia respiratoria y el pH de la sangre aumentaron, y pCO2 disminuyó, hasta que se alcanzó una temperatura rectal de 42 grados C. Con el aumento adicional de la temperatura rectal, la velocidad respiratoria y el pH comenzaron a disminuir, mientras que el pCO2 comenzó a aumentar. Los conejos murieron cuando la temperatura rectal alcanzó los 43 grados C. Se discutieron características de la función respiratoria peculiar al conejo.
Uso ambulatorio de fenotiazina y depresión de médula ósea. Un informe de la unidad de epidemiología de drogas y el programa de vigilancia colaborativa de drogas de Boston. La depresión de la médula ósea inducida por la fenotiazina (BMD) se evaluó en tres bases de datos separadas pero complementarias: (1) Entre los 1.048 pacientes admitidos en hospitales psiquiátricos, no hubo evidencia de depresión subclínica de la contagio de células blancas (WBC) atribuible a las fenotiazinas utilizadas antes de la admisión. (2) Entre 18,587 pacientes hospitalizados, hubo 34 pacientes admitidos para la DMB en ausencia de neoplasia o terapia de fármacos citotóxicos previos; uno de estos informó que usaba clorpromazina clorhidrato, pero es dudoso si este fármaco fue la causa de la DMB. (3) Entre los 24.795 pacientes médicos, quirúrgicos y ginecológicos encuestados durante un período de diez meses en 1972, había cuatro que fueron admitidos para la DMB; uno de estos últimos tenía una leucopenia reversible atribuida al clorhidrato de trifluoperazina.
[Hiperacidulación tumoral a través de la infusión intravenosa de glucosa reforzada por la aplicación de amigdalina y beta-glucosidasa (transl del autor)]. La peracidez tumoral en tumores de otra forma moderadamente hiperacidulados o regiones tumorales de ratas Wistar carcinosarcoma portadoras de DS alcanzado por la infusión de glucosa se incrementó sustancialmente por la infusión simultánea de amigdalina e intramuscular i.m. o i.v. de la beta-glucosidasa. Aquí el valor de pH del tejido sano, medido en el músculo esquelético, se mantuvo sin cambios. Mediante dicho proceso, la hiperacidez tumoral se ha elevado a un nivel de deltapH = 0,97; alcanzando una diferencia de pH entre el tejido tumoral y normal de hasta deltapH = 1,6. En un caso, la inclinación de la reducción del pH en el tumor aumentó al 870%. Además, la administración combinada de glucosa, amigdalina y beta-glucosidasa evocó un efecto carcinostático significativo (hipogenesis, regresión tumoral) siendo comparable con la acción de una dosis de Ifosfamid de 150 mg-kg-1. Sin embargo, la aplicación i.m. e.v. de la beta-glucosidasa durante la anestesia resulta en un proceso general que aún sigue siendo demasiado tóxico. Por lo tanto, los estudios de optimización están destinados con el objetivo particular de mejorar aún más la comparabilidad de este proceso.
Estudios del dolor producido por las preparaciones de acetato de mafenida en las quemaduras. En un ensayo clínico doble-ciego triple-cross-over, 37 pacientes fueron expuestos a varias formulaciones de acetato de mafenida (Sulfamylon Cream) y sus respuestas al dolor fueron registradas y convertidas en un índice de dolor semicantitativo. La concentración del 11,2% en la crema fue de dos a tres veces más dolorosa que la concentración del 5%. La hipertensión y no el nivel de pH parece ser la causa del dolor producido por la alta concentración (11,2%). La tonicidad del portador de la crema y el acetato de mafenida del 11,2% son 1,080 mOsm/kg y 1,100 mOsm/kg, respectivamente, para un total de 2,180 mOsm/kg. La crema portadora sin glicerol y una concentración de 5% de crema mafenida fueron mucho menos dolorosas que la concentración de 11,2% de mafenida. Ambos proporcionaron un gran alivio a los pacientes que recibieron los medicamentos.
Microbiol crecimiento en emulsiones de lípidos utilizados en la nutrición parenteral. La nutrición parenteral a través de la cateterización venosa central está asociada con serios riesgos, especialmente el de la septicemia. La emulsión de lípidos (Intralipid), que puede administrarse periféricamente, ha sido evaluada por su potencial para apoyar el crecimiento microbiano. Las culturas lavadas de Staphylococcus aureus, Candida albicans y tres especies de varillas Gram-negativas eran capaces de multiplicarse en la emulsión a temperatura ambiente. Las variaciones en el tamaño del inoculo no afectaron a la tasa de crecimiento. Estudios comparando la emulsión con soluciones de aminoácidos-glucosa (nutrición parenteral total [TPN]) confirmaron otros informes de que TPN inhibe el crecimiento de ciertas bacterias pero simplemente retarda la multiplicación fúngica. Cuando se añadió suero humano a la emulsión de lípidos en un intento de simular condiciones in vivo en la punta del catéter, Escherichia coli se inhibió mientras que el crecimiento de S aureus y C albicans se mantuvo inalterado.
Las concentraciones de propoxyfeno y norpropoxyfeno en los tejidos en las muertes asociadas con el clorhidrato de propoxyfeno y el napsilato de propoxyfeno. El propoxyfeno y su principal metabolito, norpropoxyfeno, se han determinado en la sangre y el hígado en 29 casos de muerte en los que el propoxyfeno, ya sea como cloruro de hidrógeno o como sal napilada, estuvo involucrado. El uso de propoxifeno napsilato (Darvon-N) contribuyó a la muerte de 4 personas, 3 de las cuales eran ex adictos a la heroína que recibían grandes cantidades de esta droga en conexión con programas de sustitución de propoxifeno. En la mayoría de los casos, las concentraciones de norpropoxifeno en la sangre superan las concentraciones de propoxifeno, aunque las determinaciones cerebrales en varios casos indican que el norpropoxifeno no cruza la barrera hematoencefálica con la misma facilidad que el propoxifeno. Basándose en la toxicidad comparativa de propoxyfeno y norpropoxyfeno en animales y las altas concentraciones de norporpoxyfeno en el tejido humano después de la administración de propoxyfeno, es posible que la norpropoxyfeno contribuya a los efectos tóxicos de propoxyfeno.
[ Manifestaciones morfológicas y morfogenesis de la reacción de trasplante vs. anfitrión en el cerebro de híbridos F1 después de la administración de células linfoides parentales y su efecto en la inoculación tumoral]. Se estableció que la introducción intracerebral de 10 min de células parentales de la vesícula causó en híbridos (CBAXC57Bl/6) cambios infiltrativos-destructivos F1 (desarrollo de infiltraciones linfocíticas, distrofia en las células nerviosas, fibras de mielina y neurogliacitos) cuya intensidad se encontró ser considerablemente mayor en los casos de inyección de células parentales de la vesícula de donantes específicamente sensibilizados. Las células de la médula de los ratones CBA produjeron cambios mucho mayores en comparación con los producidos por las células de la médula de los ratones C57Bl/6. La inoculación en el cerebro de ratones de 10 millones de células de la vesícula junto con el tumor en una dosis de 1500 células produjo un claro efecto inhibidor de corte en el crecimiento del tumor, este efecto siendo más pronunciado después de la introducción de células sensibilizadas de la vesícula de ratones CBA.
Leucodistrofia metacromatica. Estudio ultrastructural y enzimático de un caso de forma variable O. Una variante de la leucodistrofia metacromatica (MLD), la enfermedad de Austin, se caracteriza por una deficiencia múltiple de isoenzimas de aril sulfatasa. Una niña de 3 1/2 años con deterioro mental y físico progresivo había disminuido la actividad de las aril sulfatases A y B en los leucocitos, demostrado por la electroforesis del gel de acilamida. Bajo el microscopio electrónico, las muestras de biopsia del cerebro y el nervio periférico mostraron estructuras lamelares con cuerpos de zebra en los procesos citoplasmáticos de las células gliales, inclusiones granulo-membranosas con configuraciones de huellas dactilares en neuronas, y material similar a la mielina en las células de Schwann. Los resultados de nuestro estudio sugieren una naturaleza compleja de este trastorno dismetabólico, que muestra cambios ultraestructurales usualmente vistos en la MLD clásica, una deficiencia de aril sulfatasa A sólo, concomitante con los vistos en mucopolisacáridoses como los síndromes de Hurler y Sanfilippo.
Cambios en el estado de base ácida de las ovejas anestetizadas con una combinación de acpromazina sulfato de atropina y clorhidrato de cetamina. El pH, PaCO2, PaO2, bicarbonato estándar, exceso de base y pH reducido se medieron en ovejas antes y a intervalos regulares después de la administración de cetamina con y sin premedicación con atropina y acepromazina. Se observó una disminución en el pH y el PaO2 y un aumento en el PaCO2 15 minutos después de la administración de cetamina. La administración de atropina con y sin acepromazina no tuvo un efecto significativo en el pH, PaCO2 y PaO2. Los valores para el bicarbonato estándar, el exceso de base y el pH reducido no se vieron afectados significativamente. Esto indica que los cambios menores observados en el pH, PaCO2 después de la administración de cetamina son compensados por el sistema de buffer sanguíneo del animal sano.
La naturaleza molecular de la beta-galactosidasa de diferentes tejidos en dos cepas de ratón de la casa. Una cepa de ratón, C57BL/Kl, tiene alta actividad galactosidasa en todos los tejidos, mientras que otra cepa, DBA/2/Kl, tiene baja actividad determinada por el locus Bgs. La beta-galactosidasa de estas dos cepas fue parcialmente purificada por un procedimiento de cinco pasos: acidificación, precipitación de sulfato de amonio, filtración de gel a dos pH y enfoque isoeléctrico. No se encontraron diferencias cualitativas entre las preparaciones de enzimas de las dos cepas. Tenían curvas de inactivación térmica idénticas, pH óptima, peso molecular y puntos isoeléctricos, y los valores de Km eran muy similares. Por lo tanto, parece que esta diferencia genética en la actividad de las enzimas probablemente no pueda explicarse por una variación de la actividad específica de la galactosidasa, sino que refleja una diferencia en el número de moléculas de las enzimas. Ocho diferentes isoenzimas se separaron del hígado, el riñón y la médula. Cada isoenzima tiene una movilidad electroforética diferente y hay un aumento gradual en el peso molecular de 143.000 a 380.000 comenzando con la proteína con el punto isoeléctrico más bajo. Una interpretación probable es que las isoenzimas se unen a un polipéptido más pequeño en números variables además del polipéptido enzimático por sí mismo.
Influencia de algunos factores físicos en la supervivencia del virus de la vacuna contra la enfermedad de Marek. La vacuna de la enfermedad de Marek (MD) asociada a células se suspendió en diluciones normalmente utilizadas para la vacunación en siete diluentes comercialmente disponibles y en brote de fosfato de triptoza. La estabilidad de las vacunas diluidas se determinó por ensayo en culturas de células sometidas a 0 a 37 C durante 0 a 90 minutos. Las temperaturas óptimas de retención para la supervivencia del virus de la vacuna MD variaron con los diluentes específicos empleados. Algunos diluentes proporcionaron la mayor supervivencia cuando la dilución estaba en 0 ° C y se mantuvo en 0 ° C, mientras que otros funcionaron mejor cuando la dilución estaba en 25 ° C, seguido de enfriamiento y retención en 0 ° C. Los diluentes que permitieron la mayor supervivencia cuando se probó en 37 ° C también funcionaron bien bajo otros regímenes de temperatura. El espectinomicina dihidrocloruro pentahidrato y varios compuestos tampón se añadieron a los diluentes comerciales utilizados para diluir la vacuna MD. Los aditivos que producen osmolalidad de 745 mOsm/kg y más reducen significativamente la supervivencia del virus de la vacuna. Los efectos adversos de la alta presión osmótica fueron acentuados por el tiempo de retención prolongado, la temperatura de incubación elevada, y las manipulaciones físicas, incluyendo la mezcla mecánica o la expresión a través de una jeringa y aguja. La supervivencia satisfactoria del virus de la vacuna MD fue proporcionada por un diluente comercial especialmente formulado para acomodar los cambios de osmolalidad del pH producidos por la adición de espectinomicina dihidrocloruro pentahidrato.
Los efectos de la administración aguda y crónica de hidrógeno nicotínico (+)-tartrato y su posterior retirada sobre la actividad de la triptofano pirrolasa en el hígado de ratas y su comparación con la morfina, la fenobarbitona y el etanol. La administración aguda de hidrógeno nicotínico (+)-tartrato aumenta la actividad de la triptofano pirrolasa en el hígado de ratas por un mecanismo hormonal. El tratamiento crónico con nicotina inhibe, y la retirada posterior aumenta, la actividad de la pirrolasa. La inhibición durante el tratamiento crónico no se debe a una síntesis defectuosa de apoenzimas ni a una disminución de la disponibilidad de cofactores. La regeneración de NADP+ en el hígado in vitro e in vivo reverte la inhibición. La administración crónica de nicotina aumenta la concentración de NADPH en el hígado. Los efectos de la nicotina son similares en gran medida a los demostrados anteriormente para la morfina, la fenobarbitona y el etanol. Se comparan todos los efectos y se discute su posible importancia en relación con la adicción a las drogas.
Plástico en las hojas primarias de Phaseolus vulgaris. Desarrollo de la actividad de la adenosina trifosfatasa plástica durante la vegetación. Los etioplastos de hojas de frijoles de cultivo oscuro mostraron actividad de ATPase (adenosina trifosfatasa) que tenía un pH óptimo de 8.5, fue estimulado por dithiotreitol y no afectado por la luz. Los cloroplastos de grano mostraron una baja actividad de ATPasa inducida por la oscuridad con un pH óptimo de 8.5 y una cantidad sustancial de actividad desencadenada por la luz con un pH óptimo de 8.0. La actividad desencadenada por la luz dependía de dithiotreitol y Mg2+ y fue promovida por el metosulfato de fenazina. La actividad de la ATPase desencadenada por la luz fue completamente inhibida por 20mum-dicyclohexylcarbodi-imide. Los etioplastos desarrollaron la actividad de la ATPase desencadenada por la luz en respuesta a la iluminación de 30 minutos de las hojas etioladas. Durante las 48 horas de vegetación inducida por la luz de las hojas de cultivo oscuro, se observó un aumento del 70% de la actividad de la ATPase del cloroplasto encontrada después de la luz inducida y una caída del 30% de la actividad inducida por la oscuridad, ambas expresadas en una base por hoja. Dado que la mayor parte de estos cambios ocurrió durante los primeros 30 minutos de iluminación, se concluye que la mayor parte o toda la ATPase del cloroplasto estaba presente en el etioplasto, una conclusión idéntica a la de Lockshin et al. (1971) para el maíz. Durante las 48 horas de vegetación, se observó un aumento de diez veces en la cantidad de membrana de thylakoid en la hoja, junto con una caída del 83% en la actividad de ATPase por m2 de membrana de thylakoid, medida después de la luz.
Ciclo de ácido tricarboxílico y enzimas relacionadas en metilotrópicos facultativos restringidos. El aislamiento se describe de culturas puras de tres bacterias metilotrópicas que no utilizan metano, que, junto con el Bacillus PM6 descrito anteriormente, tienen un rango muy limitado de sustratos de crecimiento; estos organismos se denominan "metilotrópicos facultativos restringidos". Dos de estos aislados, W6A y W3A1, crecen solo en glucosa de los 50 compuestos no C1 probados, mientras que el tercer aislado S2A1 y Bacillus PM6 crecen en betaína, glucosa, gluconato, alanina, glutamato, citrato y agar nutricional, pero no en ninguno de otros 56 compuestos no C1. Los extractos sonicos crudos de los isótopos W6A y W3A1 cultivados con trimetilamina y glucosa, y de los C2A1 cultivados con trimetilamina (un metilotrofo obligatorio) contienen (i) ninguna actividad detectable de la 2-oxoglutarato deshidrogenasa, (ii) actividad específica muy baja o cero de la deshidrogenasa succinata y la síntesis de succinil-CoA y (iii) la actividad de la deshidrogenasa de isocitrato dependiente de NAD+. Los extractos de metilotrópicos PM6 y S2A1 cultivados con trimetilamina tienen (i) una actividad específica de 2-oxoglutarato deshidrogenasa muy baja, (ii) una actividad específica comparativamente alta de la succinato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa y succinil-CoA sintetasa y (iii) la actividad de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NADP+ pero sin actividad de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NAD+. La actividad de la mayoría de estas enzimas se incrementa durante el crecimiento en glucosa, alanina, glutamato o citrato, pero sólo muy baja actividad 2-oxoglutarato deshidrogenasa están presentes en todas las condiciones de crecimiento. Los metilotróficos facultativos restringidos crecen sobre ciertos compuestos no C1 en ausencia de 2-oxoglutarato deshidrogenasa y, en algunos casos, de otras enzimas del ciclo del ácido tricarboxílico; estas lesiones no pueden, por lo tanto, ser la única causa de metilotrofia obligatoria.
Desaturación del ácido steárico por el hígado y el tejido adiposo de ratones obesos-hiperglicémicos (ob/ob). La actividad de la desaturasa de ácido esteárico se ha probado en preparaciones de tejido adiposo perigenital y hígado de ratones femeninos magros y genéticamente obesos (ob/ob). La actividad total en el tejido adiposo perigenital de ratones obesos fue tres veces mayor que en el tejido de ratones magros, pero por gramo de tejido adiposo la actividad fue dos veces mayor en el tejido de ratones magros. En el hígado, la actividad en ratones obesos se elevó a las 8 semanas de edad, permaneció elevada hasta las 24 semanas y luego disminuyó a la mitad a las 48 semanas, pero en todas las edades fue mayor que en ratones magros. La disminución en la actividad de la desaturasa hepática de ratones obesos a las 48 semanas correspondió a un cambio en la composición de ácidos grasos de los lípidos hepáticos hacia los encontrados en ratones magros. Mientras que en el tejido adiposo gran parte de la actividad enzimática aumentada puede deberse a la hiperplasia de tejido, en el hígado es principalmente una actividad aumentada por célula.
La estimulación por transmisores sinápticos de la incorporación de oleato en el fosfolipido de las membranas sinápticas. La noradrenalina estimuló la incorporación de oleato en los glicerofosfolípidos de colina de las membranas sinápticas del cerebro guinea-porco incubadas en el buffer de fosfato de sodio. En presencia de 1 mm-NaF, la noradrenalina estimuló la incorporación de oleato en los glicerofosfolípidos de colina, fosfatidilinositol, etanolamina glicerofosfolípidos, fosfatidilserina y ácido fosfatídico de membranas sinápticas incubadas en el buffer de 10 mm-Tris-HCl. En Tris-CHl que contiene 1 mm-NaF, la estimulación de la incorporación de oleato en los glicerofosfolípidos de la colina por la noradrenalina fue potenciada por ATP, CaCl2, MgCl2 y CoA más dithiotreitol. La concentración óptima de CaCl2 para la estimulación por 10 mum-noradrenalina fue 10 mum. En presencia de CaCl2, la concentración óptima de ATP-2MgCl2 estaba en el rango de 0.1-1 mm. Acetilcolina, carbamoilcolina, 5-hidroxitriptamina, dopamina, histamina y ácido gamma-aminobutírico también estimularon la incorporación de oleato en los glicerofosfolípidos de la colina de las membranas sinápticas. Se obtuvieron curvas de dosis-respuesta sigmoida, similares a las obtenidas previamente para la estimulación por los mismos agonistas de la hidrólisis de la fosfatidilcolina por la fosfolipasa A2 (Gullis & Rowe, 1975a). La tasa inicial de transferencia de oleato de oleoyl-CoA a colina glicerofosfolipida fue similar a la tasa inicial de transferencia de oleato-albumina, estimulada por la noradrenalina. La transferencia de oleato de oleoyl-CoA no fue notablemente estimulada por la noradrenalina, sino que fue estimulada por ATP y MgCl2.
La interacción de los iones de magnesio con el ácido teichoico. La unión de Mg2+ al ácido teicoico de la pared de Lactobacillus buchneri N.C.I.B. 8007 se midió mediante diálisis de equilibrio a concentración iónica controlada y pH. En una solución acuosa que contenía 10mM-NaCl a pH 5.0, un ion Mg2+ se vinculó para cada dos grupos de fosfatos del ácido teichoico, con una constante de asociación aparente, Kassoc. = 2.7 x 10(3) M-1. Al bajar el pH por debajo del pKa de los grupos fosfatados, la cantidad de Mg2+ se redujo simultáneamente con la disminución de la ionización de los grupos fosfatados. Tanto la cantidad de Mg2+ unida al ácido teicoico como las constantes aparentes de asociación fueron similares en presencia de concentraciones de 10 mM de NaCl o KCl, pero disminuyeron notablemente en presencia de 10 mM-CaCl2 debido a la competencia entre Ca2+ y Mg2+ por los sitios de unión. Un efecto similar se encontró cuando la concentración de NaCl se aumentó de 0 a 50 mM. Los resultados se discuten en relación con la función del ácido teichoico en las paredes de las bacterias gram positivas.
El mecanismo de la hidrólisis del beta-glicerofosfato por la fosfatasa alcalina renal. Para identificar los grupos funcionales involucrados en la conversión del beta-glicerofosfato por fosfatasa alcalina (EC 3.1.3.1) del riñón de cerdo, se investigó la cinética de la fosfatasa alcalina en el rango de pH 6.6-10.3 a concentraciones de substrato de 3 muM-30 mM. De las parcelas de log VH+ contra pH y log VH+/KH+m contra pH se identificaron un grupo funcional con pK = 7,0 y dos grupos funcionales con pK = 9,1. Estos grupos están involucrados en la vinculación de sustrato. Se encontró otro grupo con pK = 8,8, que en su forma sin protones cataliza la conversión de sustrato. GSH inhibe la fosfatasa alcalina de forma reversible y no competitiva al atacar el Zn (II). Se investigó la influencia de la concentración de H+ en la activación por los iones Mg2+ del fosfato renal alcalino de cerdo entre el pH de 8,4 y 10,0. La unión del substrato y los iones activadores de Mg2+ ocurre independientemente en todos los valores de pH entre 8,4 y 10,0. El mecanismo de activación no es afectado por la concentración de H+. Los iones Mg2+ están unidos por un grupo funcional con un pK de 10,15. Se propone un esquema para la reacción entre la enzima, el substrato, Mg2+ y H+ y se deriva la ecuación de tasa global. El mecanismo de la unión y división del substrato por los grupos funcionales del centro activo se discute sobre la base de un modelo. Mg2+ parece desempeñar un papel como un efector autósterico.
Se estudió la dependencia del pH y la modificación del grupo de la beta-lactamasa I. Se estudió la dependencia del pH de los parámetros cinéticos para la hidrólisis del anillo de beta-lactamasa por la beta-lactamasa I (penicillinasa, EC 3.5.2.6). Benzilpenicilina y ampicilina (6-[D(-)-alfa-aminophenylacetamido]ácido penicillánico) se utilizaron. y kcat./Km para ambos sustratos dieron parcelas en forma de campana de parámetro versus pH. La dependencia de pH de kcat/Km para los dos substratos dio el mismo valor (8,6) para el pK aparente más alto, y por lo tanto este valor puede caracterizar un grupo en la enzima libre; los valores de pK aparente más bajos fueron de alrededor de 5 (4,85 para la benzilpenicilina, 5,4 para la ampicilina). Para la benzilpenicilina ambos kcat. y kcat./Km dependía del pH de la misma manera. El valor de Km para la benzilpenicilina era, por lo tanto, independiente del pH, lo que sugiere que la ionización de los grupos cataliticamente importantes de la enzima no afecta la unión de este substrato. La dependencia del pH del kcat. para la ampicilina difería, sin embargo, presumiblemente debido al grupo polar en la cadena lateral. Se probó la hipótesis de que el grupo pK5 es un grupo carboxílico. Tres reactivos que normalmente reaccionan preferentemente con los grupos carboxílicos inactivaron la enzima: los reactivos fueron el reactivo K de Woodward, un carbodi-imido soluble en agua, y el trietilóxonio fluoroborato. Estos hallazgos tienden a apoyar la idea de que un grupo carboxilato juega un papel en la acción de la beta-lactamasa I.
Enzima oxidasa peroxidasa de Datura innoxia. Oxidación del éster etílico de ácido formilfeniláctico. Un sistema enzimático de las raíces de Datura innoxia oxidando el éster etílico de ácido formilfeniláctico fue purificado 38 veces por métodos convencionales como la fracción (NH4)2SO4, la adsorción negativa en el gel de alumina Cy y la cromatografía en la celulosa DEAE. Se demostró que la enzima purificada cataliza la oxidación stoico-eiométrica del éster etílico del ácido formilfeniláctico al éster etílico del ácido benzoilformico y al ácido formico, utilizando el O2 molecular. Los análogos de sustrato como el fenilacetaldehído y el fenilpiruvato se oxidaron a una tasa muy baja, y el formilfenilacetonitrilo era un agente inhalador, cianuro, compuestos tiolicos y ácido ascórbico. Esta enzima era idéntica a una isoenzima oxidasa-peroxidasa. Otra isoenzima de la oxidasa-peroxidasa que se separó en la cromatografía DEAE también mostró actividad de la oxidasa del éster de ácido formilfeniláctico, aunque en una medida menor. Las propiedades de las dos isoenzimas de la oxidasa se compararon y se demostró que difieren en sus propiedades de oxidación y peroxidación. La oxidación del éster etílico de ácido formilfeniláctico también fue catalizada por la peroxidasa de raíz de caballo. Las isoenzimas de Datura mostraban espectros de hemoproteínas típicos. La oxidación del éster etílico de ácido formilfeniláctico fue diferente de otras reacciones catalizadas por la peroxidasa en no ser activado por Mn2+ o monofenoles. La oxidación fue inhibida por varios mono- y polifenoles y por la catalasa. Se propone un mecanismo de reacción para la oxidación.
Purificación de la 2-oxoaldehído deshidrogenasa y su dependencia de aminas inusuales. 2-Oxoaldehído deshidrogenasa se purificó del hígado de oveja y dio una banda en electroforesis de poliacrilamida-gel. La enzima dependía por completo de su actividad de la presencia de Tris o de una de una serie de aminas relacionadas, todas de estructura general: (Ver artículo). Cuando más de un grupo R era hidrógeno no se observó actividad enzimática. Sólo una de estas aminas se sabe que existe en los tejidos vivos y se necesitaban grandes concentraciones de todas las aminas para la máxima actividad. L-2-Aminopropan-1-ol fue la amina más efectiva basada en el substrato Km y Vmax. los valores y los amino Kilómetros. La enzima fue activada por fosfato que bajó los valores de Km para methylglyoxal, amina y NAD+. El pH óptimo de la enzima fue de 9,3 y no hubo actividad en valores de pH inferiores a 7,8. Una búsqueda de activadores que podrían producir actividad en pH 7.4 resultó infructuosa. La enzima fue inhibida por concentraciones bastante grandes de barbitúricos (6-46 mM) y análogos nitroalcohólicos de las aminas activadoras (66-139 mM).
Determinación del ácido ribonucleico rico en poliadenilato en el núcleo y en el citoplasma de las células del plasmacitoma. Se investigaron por separado una serie de parámetros que afectan la adsorción de ARNr y ARN poli(A)-contenedor a los filtros de Millipore. La unión de ambos tipos de ARN al filtro dependía de la concentración de ARN, pH y concentración de Mg2+ de la mezcla de reacción. Ambos tipos de ARN se unen al filtro de forma óptima a valores de pH ligeramente ácidos. La unión del ARN poli(A)-contenedor al filtro mostró una amplia dependencia de pH en comparación con la del ARNr. La proporción de ARN/RNA rico en poli(A) retenido por el filtro fue máxima entre pH7 y 8. La presencia de 1 mM-EDTA o una alta concentración de NaCl (más de 0,5M) disminuyó la afinidad del ARN para el filtro. La cantidad de poli(A)-contenedor de ARN en el núcleo y en el citoplasma de una línea de células de plasmacitoma (MPC-11) etiquetada con [32P]Pi fue determinada por la técnica de filtro Millipore en condiciones que minimizaron la contaminación por ARNr. Estos datos se compararon con las estimaciones realizadas por oligo(dT)-cromatografía de celulosa. Los resultados obtenidos por estos dos métodos fueron en buena concordancia para el ARN etiquetado durante períodos cortos (hasta 2h). En los largos experimentos de etiquetado y pulso, sin embargo, la contaminación del filtro por el ARNr de aumento de la radioactividad específica en el citoplasma dio un valor erróneo para el ARN poli(A)-contenedor por la técnica de filtro de Millipore. Las determinaciones realizadas sobre la fracción nuclear por estos dos métodos no mostraron variación significativa en los experimentos de etiquetado a corto y largo plazo.
La secuencia de aminoácidos de la glutamato deshidrogenasa específica de Neurospora NADP. Los péptidos triptílicos. La deshidrogenasa de glutamato específica de NADP de Neurospora crassa fue digerida con tripsina, y los péptidos que representan 441 de los 452 residuos de la cadena de polipéptidos fueron aislados y sustancialmente secuenciados. Detalles experimentales adicionales han sido depositados como Suplementary Publication SUP 50052 (11 páginas) con la British Library (Lending Division), Boston Spa, Wetherby, W. Yorkshire LS23 7BQ, Reino Unido, de quien se pueden obtener copias bajo los términos dados en Biochem J. (1975) 145, 5.
La secuencia de aminoácidos de la glutamato deshidrogenasa específica de Neurospora NADP. Péptidos de la digestión con una proteasa estafilocócica. La proteasa extracelular de la cepa Staphylococcus aureus V8 se utilizó para digerir la glutamato deshidrogenasa específica de NADP de Neurospora crassa. De los 35 péptidos no superpuestos esperados a partir del contenido de glutamato de la cadena de polipéptidos, 29 fueron aislados y sustancialmente secuenciados. Las secuencias obtenidas fueron valiosas en proporcionar superposiciones para el alineamiento de aproximadamente dos tercios de las secuencias encontradas en los peptidos tripticos [Wootton, J. C., Taylor, J, G., Jackson, A. A., Chambers, G. K. & Fincham, J. R. S. (1975) Biochem. J. 149, 739 a 748). El péptido N-terminal bloqueado de la proteína fue aislado. Este péptido fue secuenciado por espectrometría de masa, y se encontró que tiene N-terminal N-acetilserina por Howard R. Morris y Anne Dell, cuyos resultados se presentan como un Apéndice al artículo principal. La proteasa estafilocócica mostró una especificidad muy alta para los enlaces glutamilo en el buffer NH4HCO3 utilizado. Las divisiones parciales de dos enlaces de aspartilo, ambos Asp-Ile, probablemente se atribuyeron a la proteasa. No se encontró fisión de los enlaces glutaminilo o S-carboximetilcisteinilo. Detalles experimentales adicionales han sido depositados como Publicación Suplementaria SUP 50053 (5 páginas) con la Biblioteca Británica (División de préstamos), Boston Spa, Wetherby, W. Yorkshire LS23 7BQ, Reino Unido, de quien se pueden obtener copias bajo los términos dados en Biochem. J. (1975) 1458 5.
La secuencia de aminoácidos de la glutamato deshidrogenasa específica de Neurospora NADP. Peptidos pépticos y quimotrípticos y la secuencia completa. Los péptidos pépticos y quimotrípticos se aislaron formando la deshidrogenasa glutámica específica de NADP de Neurospora crassa y se secuenciaron sustancialmente. De los 452 residuos en la cadena polipéptida, 265 fueron recuperados en el péptido y 427 en los péptidos chymotryptic. Junto con los péptidos trípticos [Wootton, J. C., Taylor, J. G., Jackson, A. A., Chambers, G. K. & Fincham, J. R. S. (1975) Biochem. J. 149, 749-755], estos establecen la secuencia completa de la cadena, incluyendo las asignaciones de ácido y amido, excepto en siete lugares donde las superposiciones son inadecuadas. Estos alineamientos restantes se deducen de la información sobre los fragmentos de CNBr obtenidos en otro laboratorio [Blumenthal, K. M., Moon, K. & Smith, E. L. (1975), J. Biol. Chem. 250, 3644 a 3654). Más información ha sido depositada como Publicación Suplementaria SUP 50054 (17 páginas) con la Biblioteca Británica (División de préstamos), Boston Spa, Wetherby, W. Yorkshire LS23 7BQ, Reino Unido, de quien se pueden obtener copias bajo los términos que se indican en Biochem. J. (1975) 145, 5 de diciembre de 1975.
Actividades de la síntesis de citrato, NAD+-linked y NADP+-linked isocitrate dehydrogenases, glutamato dehidrogenasa, aspartato aminotransferasa y alanina aminotransferasa en los tejidos nerviosos de vertebrados e invertebrados. Las actividades de la síntesis de citrato y las isocitrato deshidrogenases NAD+-ligadas y NADP+-ligadas se medieron en el tejido nervioso de diferentes animales en un intento de proporcionar más información sobre el ciclo del ácido cítrico en este tejido. En los animales superiores las actividades de la síntesis de citrato son mayores que la suma de las actividades de las isocitrato deshidrogenases, mientras que son similares en los tejidos nerviosos de los animales inferiores. Esto sugiere que en animales más altos la reacción de la isocitrato deshidrogenasa está lejos del equilibrio. Si se asume que las actividades de la isocitrato deshidrogenasa proporcionan una indicación del flujo máximo a través del ciclo del ácido cítrico, la capacidad glicolítica máxima en el tejido nervioso es considerablemente mayor que la del ciclo. Esto sugiere que la glicolisis puede proporcionar energía en exceso de la capacidad aeróbica del tejido. Las actividades de la glutamato deshidrogenasa son altas en la mayoría de los tejidos nerviosos y las actividades de la aspartato aminotransferasa son altas en todos los tejidos nerviosos investigados. Sin embargo, las actividades de la alanina aminotransferasa son bajas en todos los tejidos, excepto en los ganglios del águila y el barbilla. En estos tejidos de insectos, la glicolisis anaeróbica puede resultar en la formación de alanina en lugar de lactato.
Propiedades de la síntesis de 5-aminolaevulinato y su relación con la oxidación microsomal de función mixta en la armadura del sur (Spodoptera eridania). La actividad de la síntesis de 5-aminolaevulinato se midió en el midgut y otros tejidos del último instar larval de la armadura del sur (Spodoptera eridania Cramer, anteriormente Prodenia eridania Cramer). Se establecieron condiciones óptimas para medir la actividad con respecto a todas las variables involucradas y se encontraron diferencias considerables con respecto a las reportadas para los preparados de enzimas de mamíferos. La actividad máxima (20 nmol/h por mg de proteína) ocurre 18-24 horas después del quinto molde y luego disminuye a cantidades de rastreo a medida que las larvas envejecen y se acercan a la pupilación. La actividad de la síntesis se indujo rápidamente por la administración oral (en la dieta) de pentamethylbenzene, fenobarbital, diethyl 1,4-dihydro-2,4,6-trimethylpyridine-3, 5-dicarboxylate y 2-allyl-2-isopropylacetamide. La puromicina inhibía la inducción de la síntesis por el pentamethylbenzene. La inducción de la síntesis de 5-aminolaevulinato se correlacionó bien con la inducción de la N-demetilación microsomal de la p-cloro-N-metilanilina, con la excepción del fenobarbital, que indujo la oxidación microsomal relativamente más que la síntesis.
Nitrosis de la fenacetina. Formación de N-nitroso-2-nitro-4-ethoxyacetanilida como producto inestable de la nitrosización en solución acuosa-ácida diluida. La reacción de la fenacetina con N2O4 en ácido acético glacial a 10(0) C da N-nitroso-2-nitro-4-ethoxyacetanilida. Esta N-nitrosoacilarilamina es estable a temperaturas bajas (-30 ° C), pero inestable a temperatura ambiente. No se puede detectar N-nitroso-2-nitro-4-ethoxyacetanilida intacta cuando la fenacetina se nitroza en condiciones que simulan las del estómago (37 grados C, pH 1). En su lugar, el cloruro de 2-nitro-4-ethoxybenzenediazonium es el principal producto de reacción encontrado. Bajo las condiciones aplicadas, la N-nitrosoacilarilamina se reorganiza rápidamente por la migración de 1,3 del grupo acetil. El diazoéster resultante se disocia en la sal de diazonium correspondiente. La captura del ión de diazonio con 1-naphthol como colorante azo proporciona un medio útil para identificar el compuesto N-nitroso parental y para medir colorimetricamente su velocidad de formación. Los rendimientos obtenidos en las mezclas de nitrosado acuoso diluido son inferiores a lo esperado; se discuten las razones de este hallazgo. Los resultados preliminares de los experimentos en animales muestran que el compuesto N-nitroso es un carcinógeno de acción directa.
[Estudios termográficos e histológicos del efecto antiinflamatorio del benorilato mediante la prueba de pellets de algodón en ratas (traducción del autor)]. El efecto de (4-acetamido-fenilo)-2-acetoxi-benzoato (benorilato, Benortan) en el proceso inflamatorio se estudió termográficamente e histológicamente en pruebas de pellets de algodón en ratas. Después de la implantación del algodón-pellet, la termografía muestra una clara inhibición de la inflamación local debido al tratamiento con benorilato. El examen histológico muestra una influencia correspondiente del benorilato en la fase proliferativa de la inflamación. El éxito de la terapia antiflogística se correlaciona con el tiempo de la medicación.
Agentes antiinflamatorios ácidos: correlaciones de algunos datos físicos, farmacológicos y clínicos. Quince agentes antiinflamatorios ácidos, para los que han sido publicados previamente algunos datos clínicos, han sido examinados para su potencia en la prueba de edema del pie de ratón inducido por carrageenan, y para su acidez (pKa) y coeficientes de partición. Los datos publicados sobre la vida media sérica y la dosis clínica diaria (antiartrítica) han sido tabulados para estos fármacos y se discuten las correlaciones entre estos diversos parámetros. La prueba de carrageenan del edema del pie de ratón se ha demostrado ser un predictor bastante fiable de la dosis clínica para la mayoría de los agentes antiinflamatorios ácidos de la vida media sérica moderada.
[Prueba clínica de un nuevo derivado de la benzodiazepina en un estudio doble ciego utilizando la escala de clasificación psiquiátrica de Wittenborn (traducción del autor)]. De la prueba de un nuevo derivado de la benzodiazepina, 8-cloro-1-fenil-2,3,4,5-tetrahidro-1H-1,5-benzodiazepina-2-uno (Bu 1014), medida contra un placebo en un ensayo doble ciego, se pueden sacar las siguientes conclusiones. La prueba se llevó a cabo durante dos períodos de quince noches cada uno con un cambio entre los dos períodos. El método de cambio ha demostrado ser adecuado para revelar efectos secundarios de la sustancia que duran al menos dos semanas. Debido a las secuelas de la sustancia, sin embargo, el análisis estadístico de la información del segundo período de tratamiento no es posible con este diseño experimental. Los métodos estadísticos utilizados han demostrado ser más eficaces que los métodos habituales, ya que permiten hacer declaraciones más claras sobre la eficacia de la sustancia. Dentro del primer período de 14 días, tanto el grupo que recibió el placebo como el grupo que recibió el medicamento mostraron una disminución en la intensidad de la ansiedad. La secuela de Bu 1014 puede ser descrita como un aumento de la resistencia y la ansiedad en aquellos pacientes que recibieron el placebo en el segundo período de tratamiento.
Flavoxato y ácido 3-metilflavona-8-carboxílico. Métodos de análisis en sangre y orina, distribución y estabilidad de células rojas de plasma. Se describen los siguientes métodos de ensayo para los estudios farmacocinéticos del flavoxato (F) y de su principal metabolito, es decir, el ácido 3-metilflavona-8-carboxílico (A). Espectrofotometría para el análisis de F y de A en plasma, 2. TLC-espectrodensitometría y GLC para el análisis de A en la orina después de la hidrólisis de ácido, 3. TLC-espectrodensitometría para la determinación de la relación F: A en plasma o en orina. Se encontró que F hidroliza en A. Este proceso depende del pH y del medio. En el agua, a pH 5.0, F es estable, mientras que en el buffer de fosfato a pH 7.4 el tiempo de semihidrolisis es de 60 min. En una solución con albumina sérica bovina, en plasma de ratón, conejo, perro o humano, los tiempos de semihidrolisis son entre 5 y 60 minutos. Finalmente, las distribuciones de células rojas plasmáticas de F y de A se estudiaron in vitro en ratas, conejos, perros y sangre humana y se encontraron entre 0,8 y 2,0 para F y entre 2,1 y 4,6 para A.
[Sobre la farmacología de 9,10-dihidro-10-(1-metil-4-piperidylidene)-9-anthrol (WA 335), un antagonista de la histamina y la serotonina (transl del autor)]. La sustancia 9,10-dihidro-10-(1-metil-4-piperidilideno)-9-anthrol (WA 335) fue examinada por sus efectos antagonistas contra la histamina y la serotonina, por sus propiedades similares a la atropina, así como por una serie de otras cualidades en comparación con la ciproheptadina y el pimetixeno. Las actividades antihistamínicas y anti-serotonínicas del compuesto WA 335 en el músculo liso y el capilar no sólo superan a la de la ciproheptadina sino también a la del pimetíxeno. WA 335 muestra una unión extremadamente fuerte a los receptores de histamina y serotonina. En el rango de dosis en el que ya causa un efecto antamina, su absorción oral es muy buena. El efecto anafiláctico es mucho más fuerte que el de la ciproheptadina. Al igual que el pimetíxeno y la ciproheptadina, el WA 335 no tiene cualidades antagonistas distintivas contra la bradicinina. Los efectos anticolinérgicos de WA 335 dependen del objeto de ensayo. En los exámenes sobre el bronce del cerdo guineano y la pupila del ratón, la eficiencia de atropina corresponde a la de la ciproheptadina; es más fuerte en el vagus estimulado del gato y menos eficiente que la ciproheptadina en el estómago del ratón. WA 335 tiene propiedades similares a la atropina central. Posee una fuerte actividad anestésica superficial. Los efectos de WA 335 en la circulación dependen de la especie. A diferencia del pimetíxeno, el compuesto WA 335 como la ciproheptadina potencia los efectos de la norepinefrina en gatos. La reducción del reflejo sinusal carótido en el gato es más distintiva después de WA 335 que después de pimetixeno y corresponde a la producida por la ciproheptadina. Se necesitan dosis más altas de WA 335 que las necesarias para demostrar efectos antaminicos para provocar efectos nerviosos centrales. WA 335 no muestra potencia analgésica en ratones. La influencia sobre la temperatura corporal en el ratón es similar a la de la ciproheptadina. WA 335 es tan eficaz como el pimetíxeno en cuanto a la inhibición de la motilidad espontánea y la prolongación del sueño barbitúrico en ratones, y muestra la misma actividad antiemética que la clorpromazina en perros. A diferencia de la clorpromazina, el comportamiento de los perros y gatos se altera claramente ya por las dosis de WA 335 que causan una leve sedación.
[Acción central de WA-335-BS, una sustancia con actividad antiserotonina periférica y antihistamínica]. En ratas y ratones, el fármaco antagonista de la serotonina e histamina 9,10-dihidro-10-(1-metil-4-piperidylidene)-9-anthrol (WA 335-BS) causó efectos sedativos centrales más fuertes que la ciproheptadina. WA 335-BS también mostró una actividad más fuerte contra los efectos inducidos por la reserpina y la tremorina central que la ciproheptadina y aumentó ligeramente los efectos inducidos por la d-amfetamina: por lo tanto, puede tener propiedades antidepresivas. WA 335-BS demostró ser muy eficaz contra la agresión inducida por el aislamiento en ratones machos. Los efectos anxiolíticos relativamente pequeños pueden haber sido causados en parte por las propiedades centrales de la antiserotonina. Al igual que la ciproheptadina, WA 335-BS aumentó el consumo de alimentos en gatos. En experimentos de EEG en el conejo consciente, los fármacos antagonistas de la serotonina WA 335-BS y la ciproheptadina ejercían una actividad depresiva más fuerte en las reacciones excitantes que la clorpromazina neuroléptica. Los resultados de nuestros estudios en animales sugieren que WA 335-BS es un antidepresivo con propiedades sedantes.
Distribución y eliminación de la radioactividad en ratas después de la administración de 14C-4-acetamidophenyl-2-acetoxybenzoate (benorilato). Después de la administración oral de 4-acetamido-fenil-2-acetoxybenzoato (carboxyl-14C) (benorilato) a ratas, no se detectaron diferencias brutas 7.5 h después de la administración con respecto a la distribución de 14C en diversos tejidos, incluidas las secciones superiores del intestino delgado. Se encontró una alta concentración de 14C en las secciones inferiores del intestino 4 horas después de la administración. El 14C en el intestino estaba presente como benorilato inalterado, como se detecta por la cromatografía de capa delgada, lo que sugiere que la absorción del benorilato era lenta. La inyección intravenosa de 14C-benorilato en ratas mostró que el fármaco tenía una tasa de eliminación relativamente alta de la sangre con una vida media de 1,9 h. En la sangre, el benorilato debe ser rápidamente hidrolizado enzimáticamente ya que no se pueden detectar metabolitos de 14C, excepto el ácido salicílico.
Estudios comparativos de fármacos parasimpatolíticos en el estómago (teste doble ciego) y análisis de la relación entre la forma gástrica y el tono. Los efectos de 3 tipos de fármacos parasimpatolíticos (bromuro de timépidio, bromuro de hioscina-N-butil y bromuro de primonio) y placebo (solución salina fisiológica) en el tracto gastrointestinal se evaluaron röntgenográficamente por técnica doble ciego en un total de 101 sujetos humanos masculinos. Los resultados pueden ser resumidos de la siguiente manera: 1. Hubo diferencias significativas en la tasa hipotónica como uno de los índices del tono gástrico entre timepidium-bromida y placebo. Los efectos de los tres fármacos experimentales fueron significativamente altos en comparación con el placebo en el movimiento peristáltico del estómago. El efecto del timepidium-bromuro fue significativamente diferente al del placebo en el lugar de llegada del bario. La comparación de los grados de tono gástrico entre los ensayos principales y de control reveló que el efecto del placebo obtenido en el ensayo principal era significativamente inferior al de la hioscina-N-butilbromida obtenida en el ensayo de control, mientras que no hubo diferencias significativas en los efectos entre los 3 fármacos activos. Los efectos de cada fármaco en el tono gástrico que se obtuvo por estado hipertónico, normotónico y hipotónico se evaluaron por estratificación. El resultado mostró que el efecto del bromuro de timepidio era significativamente mayor que el del placebo. Todos los fármacos activos no fueron significativamente diferentes en términos de 7 valores observados cada uno en la forma gástrica.
[Tratamiento de la insuficiencia pancreática exocrina con lipasa fúngica (transl del autor)]. 7 pacientes con insuficiencia pancreática exocrina grave han sido tratados con una enzima lipolítica extraída de Rhizopus arrhizus. Comparando la lipasa fúngica con un placebo, el fármaco redujo el peso diario de las heces de 809 g a 443 g en promedio, es decir, en un 45,2%. La steatorrea se redujo de 75,6 g/24 h a 32,9 g, es decir, en un 56,5%. Cuando se incuba la enzima in vitro en soluciones salinas de pH diferente durante 1 h, la pérdida de actividad lipolítica es del 13% en pH 5, del 15% en pH 4 y del 19% en pH 3. Por lo tanto, la enzima, como las proteases fúngicas, casi no es alterada por el ácido clorhídrico en concentraciones que se encuentran fisiológicamente en el estómago.
Estudio de la esporulación de Bacillus thuringiensis var. de Thuringiensis. Durante el cultivo sumergido de Bacillus thuringiensis var. Thuringiensis en fermentadores de 300 y 3000 litros, la lisis ocurrió al final de la fase exponencial de crecimiento. Posteriormente se formaron nuevas células vegetativas que generalmente se esporulaban. En el momento de la lisis, la cantidad de azúcar soluble era de 1-12 g/liter, el valor de pH bajó a 5,3-5,8 del pH original de 6,8 y comenzó a aumentar después de que todas las células habían lisado. La actividad proteolítica fue baja durante la lisis y aumentó a medida que comenzó la esporulación.
Algunas observaciones sobre los efectos producidos en ratones blancos después de la inyección de ciertas suspensión de bacilos corrosivos. Las cepas estrictamente anaeróbicas y facultativamente anaeróbicas de "bacilos corrosivos" no produjeron ningún síntoma patológico cuando se inyectaron en ratones blancos y no se pudo recuperar ningún organismo viable después de 7 días. Sin embargo, cuando estas mismas cepas se combinaron con ciertas otras bacterias vivas o ciertos extractos de bacterias estériles, se desarrollaron lesiones de las que se podían aislar bacilos corrosivos incluso después de 21 días.
Hidrolas lisosomales de la epidermis. Hidrolasas de péptidos. Se han caracterizado cuatro hidrolases de péptidos distintos (EC 3-4) en la epidermis de la guinea porcina; estas son la cathepsina B1, la cathepsina C, la cathepsina D y la arilamidasa. Sus propiedades son consistentes con las de las enzimas lysosomales. La cathepsina E no fue detectada.
Solubilización micelar de ácidos grasos en medios acuosos que contienen sales biliares y fosfolípidos. Se determinó la solubilidad de los ácidos grasos en medios acuosos que contienen sales biliares por sí solos y en mezcla con lecitina (fosfatidilcolina) o fosfatidiletanolamina. Por encima del rango de pH de 2-0-7-4, el orden de solubilidad de los ácidos grasos en soluciones acuosas que contienen sales biliares era linoleico mayor que oleico mayor que elaídico mayor que palmitico mayor que steárico. La solubilidad de cada ácido graso aumentó a medida que el pH de las soluciones de las sales biliares aumentó considerablemente la solubilidad del ácido palmitico y el ácido steárico. En presencia de sales biliares y lecitina, la solubilidad del ácido oleico y el ácido elaídico disminuyó con el aumento del pH de la solución micelar, lo que indica un efecto competitivo entre los aniones de ácidos grasos y la lecitina. La solubilidad del ácido linoleico aumentó linealmente con la concentración de lecitina. La fosfatidiletanolamina como aditivo a las sales biliares aumentó la solubilidad de los ácidos grasos saturados e insaturados en el rango de pH 2-3-7-4. La eficacia de la fosfatidiletanolamina como anfífila fue similar a la de la lecitina, aunque a pH 3.0 la solubilidad del ácido graso era mayor en presencia de fosfatidiletanolamina. La importancia de estos hallazgos se discute en relación con la absorción intestinal de ácidos grasos en las ovejas.
Influencia de los productos de fosfolipolisis de fosfatidilcolina en la solubilización micelar de ácidos grasos en presencia de sales biliares. Se estudió la solubilidad de los ácidos grasos en soluciones acuosas que contienen sales biliares y lysolecitina a valores de pH entre 2-0 y 7-4. Tanto los isómeros 1-acilo como 2-acilo de la lisolecitina aumentaron la solubilidad de los ácidos grasos en la misma medida, siendo el orden de solubilidad linoleico mayor que oleico mayor que elaídico mayor que palmitico mayor que steárico. Se determinó la influencia de los productos de la fosfolipólisis de la lecitina en la solubilidad del ácido palmitico. En una base molar, la lysolecithin fue más eficaz que las sales biliares en promover la solubilización del ácido graso. En las soluciones de sales biliares en las que la concentración de fosfolípidos era constante en una base molar, la solubilidad del ácido palmitico disminuyó linealmente con la sustitución progresiva de la lecitina por lysolecitina. El ácido palmítico se solubilizó en la misma medida en la sustitución de la lecitina por la lisolecitina en una base de peso constante. En la solución de sal biliar que contiene lisolecitina y ácido oleico en cantidades equimolares, la solubilidad del ácido palmitico fue similar a la de la solución de sal biliar que contiene lecitina en proporciones equivalentes. Los resultados se discuten en relación con la acción de la actividad fosfolipolítica en la absorción intestinal de ácidos grasos en las ovejas.
La purificación y caracterización de la proteína de unión de folato humano de bajo peso molecular utilizando la cromatografía de afinidad. La proteína de unión de folato de bajo peso molecular (FABP) ha sido purificada 1000 veces a una actividad específica de 7,2 g de ácido pteroylglutámico (PGA) vinculado por mg de proteína. Este FABP purificado representa dos bandas de proteínas que se unen a PGA en el electroforesis del disco de poliacrilamida, eluten de la DEAE-celulosa en el buffer de fosfato de 0,001 M, manchas positivas con PAS, eluten de las columnas de afinidad de la sefarosa con el metil alfa-mannosido y muestran tres picos principales (pl = 6,8, 7,5, 8,2) por enfoque isótropo. La unión de PGA a FABP purificado depende del pH y es inhibida por la urea.
Estudios de proteínas monoclonais IgA e IgA derivadas de un solo paciente. Evidencia de cadenas ligeras idénticas y regiones variables de la cadena pesada. Dos inmunoglobulinas, IgA(K) e IgG(K), fueron aisladas del soro de un solo paciente con dos componentes monoclonais (proteínas biclonais). Después de la separación en cadena, se encontró que las cadenas de luz de cada molécula eran idénticas por los siguientes criterios: movilidad electroforética bajo diferentes condiciones de pH y disociación, compuesto de aminoácidos, análisis de huellas dactilares de péptidos trípticos y de 14C-succinilados péptidos quimotrípticos, y secuencia de aminoácidos de los residuos de N-terminal 40. Las cadenas pesadas eran indistinguibles para los residuos de aminoácidos N-terminal 45. Estos datos son consistentes con la hipótesis de que una sola región de variable de cadena pesada (VH) puede estar asociada con dos diferentes genes de constante de cadena pesada (CH).
Propiedades conformacionales de la albumina de plasma bovino con un enlace peptídico interno dividido. Como se mostró anteriormente, las proteinasas frecuentemente asociadas con las muestras de albumina plasmática catalizan una división muy limitada y específica de la molécula de albumina cuando existe en el estado de conformidad F cerca del pH de 3,7. El producto proteolítico primario, BPA, tiene un peso molecular similar o idéntico al de la proteína madre pero produce dos grandes fragmentos de peso molecular de aproximadamente 46000 y 23000 en reducción. Se presenta aquí la evidencia de que la escisión ocurre dentro del ciclo de disulfuro entre Cys390 y Cys434 sin pérdida detectable de pequeños péptidos, la composición de aminoácidos de BPA siendo idéntica a la de la proteína madre dentro del error experimental. Cleavage expone un nuevo residuo de fenilalanina amino-terminal y puede ocurrir en el enlace Glx392-Phe393 aunque existe la posibilidad de que ocurra en otro enlace X-Phe en la región no secuenciada de residuos 400-402. La proteína dañada tiene una estructura secundaria algo alterada como se juzga a partir de las mediciones de dispersión rotatoria óptica y dicroísmo circular, probablemente una pérdida aproximada del 15% en helicidad. El volumen hidrodinámico se incrementa aproximadamente en un 20%. Sin embargo, varios estudios físicos indican que la estructura terciaria es sorprendentemente similar a la de la proteína nativa. De mayor importancia es el hecho de que la proteína todavía se somete a las transiciones N-F y N-B, aunque en ambos casos ocurren a un pH algo más moderado que en la proteína madre. Además, todavía se observa una sensibilidad de la transición N-B a Ca2+ y el comportamiento de unión hacia el ácido 8-anilino-1-naphthalenesulfonico es esencialmente inalterado. Los resultados se entienden mejor en términos del concepto de una estructura multidominio que ha sido sugerido con frecuencia para el plasma ablumin. La división de obligaciones daña un dominio, pero deja la estructura general esencialmente inalterada, excepto por algún debilitamiento de la interacción entre dominios.
Detección y caracterización parcial de la lipoproteína lipasa en la aorta bovina. Los extractos de acetona-éter en polvo de la aorta torácica bovina contienen la actividad de la lipasa que tiene un pH alcalino máximo (7.8-8.4) y se estimula 4-10 veces al agregar el soro o apolipoproteína-glutamato a la mezcla de ensayo. La activación sérica es completamente revertida por la apolipoproteína-serina o apolipoproteína-alanina aislada. La lipólisis es fortemente inhibida por NaCl (0,5 M) y sulfato de protamina (1 mg/ml) y parcialmente inhibida por heparina. Basándose en estas características, la lipasa se identifica como lipoproteína lipasa.
Pirofosfotransferasa de nucleótido purino de Streptomyces morookaensis, capaz de sintetizar pppApp y pppGpp. La pirofosfotransferasa del nucleótido purino fue purificada a una aparente homogeneidad a partir de un filtro de cultura de Streptomyces morookaensis. Es una proteína monomérica con un peso molecular de 24 000-25 000, y su punto isoeléctrico es de 6,9. La enzima sintetiza nucleosídeos purinos 5'-fosfato (mono, di, o tri) 3'-difosfatos tales como pppApp, ppApp, pApp, pppGpp, ppGpp y pppIpp al transferir un grupo pirrofosforilo de la posición 5'-de ATP, dATP y ppApp a la posición 3'-de los nucleótidos purinos. La enzima purificada catalizó la formación de 435 mumol de pppApp y 620 mumol de pppGpp de ATP y GTP por min mg de proteína bajo las condiciones estándar. La enzima requiere absolutamente un catión divalente para la actividad, y el pH óptimo para la actividad de la enzima está por encima de 10 para Mg2+, para Co2+ y Zn2+ de 9 a 9.5, y para Fe2+ de 7,5 a 8. Se determinaron las siguientes constantes Michaelis: AMP, 2.78 mM; ADP, 3.23 mM; GMP, 0.89 mM; GDP, 0.46 mM y GTP, 1.54 mM, en el caso de donante de ATP. La enzima es inhibida por guanina, guanosina, dGDP, dGTP, N-bromosuccinimide, iodacetato, borato de sodio y acetato de mercurio.
Proteína quinasa en las células vegetales cultivadas. Una proteína quinasa (EC 2.7.1.37) que fosforila las histonas se purificó parcialmente de las fracciones solubles de las células vegetales cultivadas. El pH óptimo era de 7,5 a 9.0. La actividad no fue estimulada por AMP cíclico exógeno. Fue termolable y completamente dependiente de la presencia de Mg2+ o Mn2+ para la actividad. El p-cloromercuribenzoato inactivó esta enzima y esta inactivación fue superada por el mercaptoetanol.
Adenosina trifosfato: nicotinamida mononucleotide adeniltransferasa de hígado de cerdo. Purificación y propiedades. Trifosfato de adenosina: la nicotinamida mononucleotide adenyiltransferasa (EC 2.7.7.1) ha sido purificada aproximadamente 3.500 veces de un extracto de núcleos de hígado de cerdo a una actividad específica de 40 mumoles de NAD+ por min por mg de proteína. Se encontró que la enzima tiene un peso molecular de 203 000, una relación de fricción de 1,6 y un punto isoeléctrico de aproximadamente 5. Las constantes de Michaelis para ATP y NMN fueron 0,11 mM y 0,12 mM, respectivamente.
Fosfolipasa A2 isoenzima del páncreas de cerdo. Purificación y algunas propiedades. El páncreas porcino sintetiza una prefosfolipasa A2 que se produce en una proporción de 5 : 95 en comparación con el zymógeno más abundante de la misma enzima (fosfatida-acilhidrolasa; EC 3.1.1.4). Estas dos prefosfolipases podrían ser bien separadas por la cromatografía de CM-celulosa. Tanto la forma activa como la zymogénica de la isoenzima fueron aisladas y purificadas. Los péptidos de activación de ambas prefosfolipases parecían ser idénticos, mientras que las enzimas activas mostraron algunas diferencias interesantes. Las diferencias más notables fueron la pérdida de una histidina y una metionina en la isoenzima, correspondientes a los residuos 24 y 27, respectivamente, en la alfa-fosfolipasa A2. La especificidad posicional y estereoscópica de ambas enzimas es la misma, pero la actividad específica de la beta-fosfolipasa A2 es menor. El peso molecular de la isoenzima se estimó en alrededor de 14 000, mientras que los puntos isoeléctricos fueron 5,1 y 5,9 para el isoprecursor y la isoenzima activa, respectivamente.
Cílico nucleotídeo fosfodiesterasa en semilla de seda. Caracterización de la GMP fosfodiesterasa cíclico. La existencia de la fosfodiesterasa GMP cíclico (EC 3.1.4.-) se demostró en larvas de serpientes de seda por filtración de gel del homogenato. La fosfodiesterasa GMP cíclico se separó de las fosfodiesterases AMP cíclicas por cromatografía de columna en hidroxiapatita y Sephadex G-200. La enzima tiene un peso molecular de aproximadamente 260 000, y un pH óptimo de 8,3 y un valor de Km de 2 muM. La enzima es activada por 5 mM de Mg2+ y 2 mM de Mn2+. La actividad de la GMP fosfodiesterasa cíclico fue inhibida en gran medida por concentraciones bajas de IMP cíclico, pero en menor medida por AMP cíclico incluso en concentraciones altas. La actividad también fue inhibida por la cafeína y la teofilina.
Glucanasas en Schizosaccharomyces. Aislamiento y propiedades de una exo-beta-glucanasa de los extractos celulares y el fluido de cultura de Schizosaccharomyces japonicus var. de versatilidad. (11 Extractos de células y fluidos de cultura extracelular de especies del género de levaduras Schizosaccharomyces mostraron actividades exo-beta (1 conduce a 3) y exo-beta (1 conduce a 6) -glucanasa (EC 3.2.1.). (2) Usando una combinación de Sephadex G-100 y DEAE-celulosa cromatografía, la exo-beta-(1 conduce a 3)-glucanases de los extractos celulares y el fluido de cultura de Schizosaccharomyces japonicus var. Versatilis fueron purificados extensivamente. Las enzimas de ambas ubicaciones mostraron propiedades de purificación similares y otras propiedades. (3) Las enzimas purificadas hidrolizaron el enlace beta-(1 conduce a 6)-glucosídico además del enlace beta-(1 conduce a 3). Los estudios de denaturación térmica, inhibición y electroforética indicaron que ambas actividades hidrolíticas eran propiedades de una sola proteína. La hidrólisis de la laminarina y la pustula siguió la cinética de Michaelis-Menten. Los Km y V para la hidrólisis de la laminarina fueron 6,25 mg/ml y 350 mumol de glucosa liberada/min/mg de proteína, y para pustulan fueron 166 mg/ml y 52 mumol de glucosa liberada/min/mg de proteína. (4) A la exo-beta-glucanasa se le asignó un peso molecular de 43 000. (5) la enzima purificada no pudo hidrolizar las paredes celulares aisladas de la levadura de panadería o de la pomba de Schizosaccharomyces o inducir la formación de protoplastos de las células intactas de S. japonicus var. Versatilis o Saccharomyces cerevisiae.
Purificación y algunas propiedades de una nueva exo-amilasa productora de maltohexaosa de Aerobacter aerogenes. La maltohexaosa productora de amilasa (EC 3.2.1.-) es la cuarta exo-amilasa conocida, las tres conocidas anteriormente son la glucoamilasa, la beta-amilasa y la Pseudomonas stutzeri maltotetraose productora de amilasa. La enzima después de liberarse de las células aerogénicas de Aerobacter por la extracción del lauril sulfato de sodio 0,1% fue purificada por precipitación de sulfato de amonio, cromatografía de columna DEAE-Sephadex y filtración de gel de Sephadex G-100 a 80 veces la actividad del extracto original de lauril sulfato de sodio, dio una única banda en la electroforesis del disco, y el peso molecular por filtración del gel fue de 54 000. Esta amilasa mostró actividad máxima a 50 grados C y pH 6,80. El rango de estabilidad del pH era relativamente amplio, la enzima reteniendo más del 90% de su actividad inicial en el rango de 6.50-9.0. El 80% de la actividad se mantuvo después de 15 minutos a 50 grados C. Esta enzima produjo maltohexaosa de almidón, amilosa y amilopectina por exo-ataque, pero no actuó en alfa- o beta-ciclodextrina, pullulan o maltohexaitol. También la enzima actuó sobre las dextrinas beta-limita de amilopectina y glicógeno para formar oligosacáridos ramificados. La reacción inusual de esta enzima en la beta-limita dextrina se discute desde el punto de vista de la estereochimia de los enlaces 1,4-alfa- y 1,6-alfa-glucosídicos. Esta es la amilasa anómala para la cual se reconoce que los enlaces 1,6-alfa-glucosídicos en los sustratos pueden imitar el efecto de los enlaces 1,4-alfa, como se observó previamente en las reacciones pseudo-priming de la E. coli fosforilasa.
Inhibición de las beta-galactosidases y beta-glucosidasa hepáticas humanas por la n-bromoacetil-beta-D-galactosilamina. N-Bromoacetyl-beta-D-galactosilamina es un inhibidor irreversible de la beta-galactosidases "ácida" y "neutral" (beta-D-galactoside galactohidrolasa, EC 3.2.1.23) del hígado humano. La inactivación de la beta-galactosidasa ácida parece involucrar un grupo con un pKa = 4,5. La inhibición de la beta-galactosidasa neutra sólo ocurre por encima del pH de 8.0. Ambas enzimas están protegidas contra la inhibición por la presencia de sustratos, lo que sugiere que el inhibidor reacciona con el sitio activo de las enzimas. Otras hidrolases lisosomales no son inhibidas por N-bromoacetil-beta-D-galactosilamina, con la excepción de la beta-glucosidasa "neutral" (beta-D-glucoside glucohidrolasa, EC 3.2.1.21). La dependencia del pH de la inactivación neutra de la beta-glucosidasa es esencialmente idéntica a la de la beta-galactosidasa neutra. La inhibición de la beta-glucosidasa por este derivado de la galactosa sugiere que la misma enzima puede unir glucosides y galactosides. Además, tanto la beta-galactosidasa neutra como la beta-glucosidasa se inactivan a 52 grados C con una vida media de 7,5 minutos. La presencia de una sola enzima con actividad tanto de la beta-glucosidasa como de la beta-galactosidasa también está respaldada por experimentos de substrato mixto.
Endo-arabinanasa de Bacillus subtilis F-11. Una arabinanasa fue purificada del líquido de cultivo de Bacillus subtilis F-11. El proceso fue el siguiente: salado por (NH4)2SO4, cromatografía repetida en hidroxi apatita y filtración de gel en Sepharose-6B. La enzima purificada se demostró ser homogénea por electroforesis de disco. Se encontró que la enzima es activa en arabinan y 1,5-arabinan, pero inactiva en fenil alfa-L-arabinofuranosida, p-nitrofenil beta-D-galactopyranosida, arabinoxylan, goma árabe. La enzima libera arabinosis, arabinobiosis, arabinotriosis y oligosacáridos superiores durante el curso de hidrólisis de 1,5-arabinan. Se encontró que los productos finales eran arabinosa y arabinobiosa después de 144 horas de hidrólisis.
Aminopeptidases en ropa de webbing larvas de mosca. Propiedades y especificidades de las enzimas de movilidad electroforética intermedia. El grupo principal de aminopeptidases (EC 3.4.11.-) de movilidad electroforética intermedia, de las larvas de Tineola bisselliella, ha sido fraccionado en seis bandas por electroforesis preparatoria de gel de poliacrilamida y las propiedades de estas fracciones han sido investigadas. Se asemejan entre sí en su pH óptima de 8,2, su peso molecular de 240 000, sus respuestas a varios inhibidores de sitio activo y cationes metálicos, y sus especificidades hacia diecisiete substratos de L-amino-acil-beta-naphthylamide. Los derivados de la metionina, la leucina, la alanina, la lysina, la arginina y el ácido glutámico fueron los más rápidamente hidrolizados. Parecen ser aminopeptidases verdaderas que hidrolizan amidos de aminoácidos, dipéptidos y oligopéptidos desde el extremo N-terminal.
Estudios sobre un activador de la (Ca2+ más Mg2+)-ATPase de las membranas de eritrocitos humanos. Un activador de la ATPasa estimulada (Ca2+ más Mg2+) presente en los eritrocitos humanos (membrana) ha sido aislado en forma soluble de los hemólitos de estas células. La purificación parcial se ha logrado mediante el uso de la cromatografía carboximetil-Sephadex. La fracción de activador resultante no contenía hemoglobina y sólo 0.3% de la actividad total de la adenilatoquinasa de la célula. Mientras que el activador se liberó de los eritrocitos sometidos a hemólisis en el buffer de 20 miosM a pH 7.6 o a pH 5.8, sólo las membranas preparadas a pH 7.6 fueron afectadas por él. Mientras que el activador se liberó de los eritrocitos sometidos a hemólisis en el buffer de 20 miosM a pH 7.6 o a pH 5.8, sólo las membranas preparadas a pH 7.6 fueron afectadas por él. Cuando la actividad de la ATPase (Ca2+ + Mg2+) se midió por la liberación de 32Pi de ATP (gamma-32P), los eritrocitos congelados, así como las membranas preparadas a pH 5.8 y a pH 7.6, expresaron valores inferiores a los observados por el ensayo para la liberación total de Pi. Cuando se utilizó ADP en lugar de ATP como substrato, se liberó una cantidad significativa de Pi por estas preparaciones de eritrocitos. Estudios adicionales revelaron (a) la producción de ATP y AMP de ADP con membranas y hemólito solo, y (b) el intercambio de fosfato de posición gamma y B en (gama-32P) ATP en presencia de membranas más hemólitos. Estas observaciones establecieron la presencia de la actividad de la adenilato quinasa en los hemólitos (libres de membranas) y en las membranas. Apoya aún más la conclusión de que la liberación de Pi de ADP por los eritrocitos humanos (congelados) y por sus membranas aisladas se debe a la formación de ATP por adenilato cinasa y la hidrólisis de este ATP generado por (Ca2+ más Mg2+)-ATPase. También se establecieron los siguientes puntos: (a) la ausencia de una ADPase en eritrocitos humanos; (b) el activador (Ca2+ más Mg2+)-ATPase aumentó la división sólo de la posición gama de ATP y (c) el activador (Ca2+ más Mg2+)-ATPase no es ni adenilato cinasa ni hemoglobina.
[Denaturación ácida y alcalina de la superoxida dismutasa]. Se describen los espectros ópticos y ESR de la eritrocita superoxida dismutasa desnaturada con ácido y alcaloides. Se encontraron cambios bruscos en la actividad y el espectro. La actividad "residual" de la proteína desnaturalizada alcalina fue mayor que la de la muestra desnaturalizada ácida. Se sugiere que la unión covalente cobre-nitrógeno es esencial para la actividad de la superoxido dismutasa de las proteínas o complejos sintéticos de cobre.
[Dispersión de la luz por suspensión celular en condiciones normales y expuesta a factores externos]. Las características de la dispersión de la luz de suspensión celular en la norma (pH 7,2, t = 20grados C) y en las influencias externas (cambio de pH y aumento de tgrado). La turbidez tauaproximatelambda-n y n = 0,2--0,3 para células en la norma. Después de que el daño celular n aumenta. La dependencia de n se correlaciona con el aumento de algunas células lesionadas determinado por la prueba de eosina. Las alteraciones de la dispersión de la luz después del daño celular se relacionaron con el aumento del depósito de la estructura intercelular en la dispersión general.
[La fragmentación y reconstrucción del sistema de ATPasa oligomicina-sensible de las mitocondrias hepáticas]. Los complejos de proteínas y proteolipídeos y la ATPase soluble insensible a la oligomicina se prepararon a partir de mitocondrias del hígado de ratas. La incubación de la ATPase soluble con proteínas y complejos proteolipídicos resultó en la restauración de la sensibilidad de la ATPase a la oligomicina a temperatura ambiente. El proceso de reconstrucción dependía del pH, el tiempo de incubación, la temperatura y otras condiciones.
[Estudio de la acetil-CoA-sintetasa de Staphylococcus aureus]. La acetil-CoA-sintetasa fue aislada de las células de St. aureus 209-P. Se ha desarrollado el método de aislamiento y purificación parcial de la enzima. Se calculan los valores de Km de la enzima para el acetato, CoA y ATP. Se ha demostrado que el p-cloromercuribenzoato y el monoiodoacetato inhiben la actividad de la enzima. La actividad enzimática se estima dependiendo de la edad de la cultura celular y de la presencia de acetato en el medio de cultivo.
[Efecto del grupo prótesis de la peroxidasa de raíz de caballo en la estabilidad de las enzimas]. Las constantes de la tasa de inactivación de la peroxidasa de raíz de caballo (HRP) apo-HRP y apo-HRP-protoporfirina (PP) se estiman en el rango de pH 2.8-12.8 y 25 grados C. Se detectan dos grupos iónicos (ácido y alcalino) en los casos de HRP y apo-HRP, que son responsables de la conformidad estable de HRP. La estabilidad de HRP dentro del rango de pH 5-10 superó 30 veces la de apo-HRP, mientras que la estabilidad del complejo apo-HRP-PP es similar a la de apo-HRP. Los datos obtenidos muestran que la formación del complejo de apo-HRP con PP, un análogo del grupo prostético carente de átomo central de Fe, prácticamente no afecta a la estabilidad de las globulas de proteínas de HRP a pH 5-10, pero estabiliza significativamente apo-HRP a los valores de pH extremos. La formación compleja de apo-HRP con grupo protetico activo - hemina - resulta en la conformación estable de las globulas de proteínas HRP, lo que sugiere un papel determinante del complejo de iones Fe - porfirina (hemina) en el soporte de la estructura estable de HRP.