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[Wheat Protein Disulfid Reduktase] Protein-Disulfid-Reduktase wird isoliert und teilweise von Weizenpflanzen gereinigt und einige Eigenschaften des Enzyms werden untersucht: pH-Optimum ist 7,4; Temperaturoptimum - 37 Grad C; Km = 2,6-10(-4)M für das Substrat (Weizenalbumin); Km = 7,5-10(-5) M für das Coenzym (NADP-H). Das Enzym ist spezifisch für NADP-H und ist nicht aktiv in Gegenwart von NAD-H. Die maximale Aktivität der Protein-Disulfid-Reduktase wird unter anaeroben Bedingungen entwickelt. Eine Technik zur Schätzung der Protein-Disulfid-Reduktase-Aktivität unter Verwendung von Weizenalbumin als Substrat wurde entwickelt. Die Enzymaktivität nimmt bei der Reifung des Mais regelmäßig ab und steigt bei der Keimung. Es wird von der jeweiligen Erhöhung oder Abnahme der Menge der Disulfidbindungen im Glutenprotein und von Veränderungen der physikalisch-chemischen Eigenschaften von Gluten begleitet. Die Inkubation von Gluten mit dem Enzympräparat beeinflusst die rheologischen Eigenschaften von Gluten (es wird schwächer) und verringert die Glutenviskosität der Glutenlösung.
[Modifikation der Pankreasribonukleaseaktivität in Komplexen mit Polyanionen]. Carboxymethylcellulose, carboxymethylchitin, sulfoethylcellulose und dextransulfat interagieren mit pankreatischer ribonuklease. Im Vergleich zur Aktivität der Ribonuklease ändert sich die Aktivität der gebildeten Komplexe in den Stadien der Transesterifikation und Hydrolyse unterschiedlich, und in jeder Phase unterscheidet sich die Wirkung der Polymeren auf die Aktivität der Ribonuklease im Wesentlichen. Die Verwendung des Ribonuklease-Dextransulfat-Komplexes in der Reaktion von Uridylil-(3' führt zu 5')-Cytidin-Synthese zeigte, dass die Protein-Syntheseaktivität vollständig aufrechterhalten wurde, wenn die hydrolytische Aktivität erheblich unterdrückt wurde.
[Kinetik und Wirkungsmechanismus der Pferderasperoxidase in der Reaktion der Oxidation von Dioxyfumarinsäure mit atmosphärischem Sauerstoff]. Quantitative kinetische Daten werden über die Oxidationsreaktion von Dioxyfumarinsäure (DFA) mit atmosphärischem Sauerstoff in Gegenwart von Pferderasperoxidase (HRP) abhängig vom pH gegeben. Die Aktivierungskonstanten der Oxidation mit Wasserstoffperoxid und Mn-Ionen werden bei pH 3.0 bestimmt. Der autokatalytische Charakter der FRA-Oxidation ist auf die Bildung von H2O2 und anderen Wasserstoffperoxid-ähnlichen Verbindungen in der Reaktion zurückzuführen, HRP-Konvertierungen im DFA-O2-System werden mithilfe der Spektrophotometrie untersucht. Ein Mechanismus der Initiierung von freien Radikalen im HRP-DFA-O2-System wird vorgeschlagen.
[Einige physikalische und chemische Eigenschaften von Serinesulfhydrase aus Hühnerleber]. Es wird ein verbessertes Verfahren zur Reinigung der Serinesulfhydrase aus der Hühnerleber beschrieben. Enzympräparate (700-fache Reinigung mit einem Ertrag von 40 Prozent der Gesamtaktivität) wurden homogen auf Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese erhalten. Das Molekulargewicht der Serinesulfhydrase beträgt 90.000; 1 Mol des Enzyms enthält 2 Mole Pyridoxalphosphat und besteht offenbar aus 2 Untereinheiten. Die Aminosäurezusammensetzung des Enzyms wird untersucht. Das Absorptionsspektrum der Serinesulfhydrase hat ein Maximum bei 430 nm, was für zahlreiche Pyridoxal-P-Enzyme charakteristisch ist. Die Position dieses Maximums hängt nicht vom pH (innerhalb seines Bereichs 6--10) und dem Vorhandensein von L-Serin, einem primären Enzymsubstrat, ab. Eine wesentliche Veränderung im Absorptionsspektrum des Enzyms wurde in Gegenwart einiger Thiolverbindungen beobachtet - DL-Homocystein, Beta-Mercaptoethanol und Glutathion (Cosubstraten der Reaktion) und L-Cystein (ein Primärreaktionssubstrat). Es wird vorgeschlagen, dass diese Veränderung des Spektrums auf die Wirkung von SH-Verbindungen auf die Enzymkonformation vor dem Beginn der enzymatischen Reaktion oder auf ihren Anfangsstufen zurückzuführen ist.
[Spezifität der extrazellulären alkalischen RNAase aus Penicillium chrysogenum 152A]. Spezifität der chromatographisch homogenen extrazellulären alkalischen RNAase von Pen. Chrysogen 152A auf RNA, synthetischen Polynukleotiden, Dinukleosidemonophosphaten und Nukleosid-2',3'-Cyclophosphaten wird untersucht. Das Enzym wird nur Guanosin-3'-Monophosphat und Guanosin-2',3'-Cyclophosphat aus der RNA freigesetzt. Guanylsäure ist ein 3-Terminal-Nukleotide von Oligonukleotiden unterschiedlicher Länge. Das Enzym hydrolysiert leicht Poly-I und spaltet praktisch nicht Poly-G. GpN hat sich als gutes Substrat für die RNase erwiesen, während G größer als p mit einer niedrigen Rate hydrolysiert. Die RNAase katalysiert die Synthese von GpC (47,7 Prozent) und GpU (38,8 Prozent). Das RNAase aus dem Pen. Chrysogen 152A wird als guanyl-RNAase betrachtet.
[Intermediate Plateaus in der Kinetik der von der biologisch abbaubaren L-Threonine-Dehydratase von Escherichia coli katalysierten Reaktion]. Es wurde gezeigt, dass für die Reaktion katalysiert durch "biodegradative" L-Threonine-Dehydratase von E. coli Stämme K-12 und 980 in 0,5 M Phosphat-Carbonatpuffer, pH 8,4 und pH 9,5, die Plots der anfänglichen Reaktionsrate (v) gegenüber der anfänglichen Substratkonzentration ([S]0 sind durch mehrere Inflationspunkte gekennzeichnet, d.h. ein Zwischenplateau. Die Plot von v versus der allosterischen Aktivator (AMP) Konzentration haben sehr komplizierte Formen: Es gibt mehrere Wendepunkte, und auch das Maximum bei der L-Threonin-Konzentration gleich 3-10(2) und 5-10(-2) M. Hohe AMP-Konzentrationen hemmen das Enzym bei hohen Substratkonzentrationen. Die reduzierte Glutathion-Dosis beeinflusst das Enzym nicht und verändert die aktivierende Wirkung von AMP nicht. Auf der Grundlage der erhaltenen Daten wird vorgeschlagen, dass das Substrat und AMP das Gleichgewicht zwischen mehreren oligomerischen Enzymformen verschieben, die sich in der katalytischen Aktivität und kinetischen Manifestationen der allosterischen Wechselwirkungen zwischen den aktiven und allosterischen AMP-Bindungsstellen in Richtung Polymerisierung unterscheiden. So wird die Funktion des untersuchten Enzyms in den Rahmen des Modells der Dissociation von regulatorischen Enzymen mit mehreren intermittierenden oligomerischen Formen diskutiert.
[Isoenzyme der Phosphorylase aus den Skelettmuskeln von Zyklostomaten und rohen Knochenfischen]. Die Trennung und teilweise Reinigung von Phosphorylase-B-Isoenzymen aus den Skelettmuskeln von Lampetra (Lampetra) und Karp (Cyprinus carpio) wurde durchgeführt. Isoenzym I wurde auf DEAE-Cellulose adsorbiert und durch KCl elutiert; Isoenzym II wurde nicht auf DEAE-Cellulose adsorbiert. Eine Reihe von kinetischen Eigenschaften der Phosphorylase der Kaltblüten wurden bestimmt, z. B. g. Km-Werte für Glucose-1-Phosphat, Glykogen und AMP; Ki für Glucose-6-Phosphat; Stabilität zur Denaturation (Erwärmung und Wirkung von Harnstoff) und pH-Optimum. Es wurde beobachtet, dass im Verlauf der Entwicklung von Wirbeltieren die Km-Werte für Substrate und allosterischen Aktivator (AMP), sowie die Hemmung durch Glukose-6-Phosphat eine Abnahme zeigten. Die Isoenzyme I und II der Phosphorylase B wurden in Bezug auf einige molekulare Eigenschaften nicht identisch gefunden, in Karp sind die Unterschiede viel ausgeprägter als in Lamprey.
[Multiple Formen von Kaninchenmuskelphosphofructokinase durch spezifische Elution offenbart]. Das modifizierte Verfahren zur Reinigung der Kaninchenskelettmuskelphosphofructokinase (PFK) wurde durch die Methode der spezifischen Elusion aus DEAE-Cellulose in 0,1 M tris-EDTA-PH 8.0 mit 10 mM Citrat entwickelt. Durch das letztere Verfahren kann PFK in Fraktionen A, B und C gelöst werden, die spezifisch mit 0,3 M Puffer und mit 1,5 M NaCl elliert werden. Die Rechromatographie jeder Fraktion zeigt ihre Interkonvertibilität. Die Präparate zeichnen sich durch Scheibenelektrophorese und Geschwindigkeits-Sedimentation aus. Die Ergebnisse von Formalinisierungsexperimenten zeigen, dass hohe Konzentrationen von Formaldehyd PFK u auf die 5,3 S-Komponente dissociieren. Das Vorhandensein der Komponente 19.3 S in den formalisierten Zubereitungen beweist gegen die Möglichkeit, dass die mittlere Komponente, die in den schlieren Mustern von PFK bei pH 8.0 dargestellt wird, auch ein Artefakt der Überschneidung ist. Komplexe Proteinverteilungsprofile, die in verschiedenen Transportversuchen beobachtet wurden, werden aus Sicht des langsamen Gleichgewichts der für PFK charakteristischen Oligomere und Konformatoren über den pH-Wert von 6 bis 9 diskutiert.
[Florierende Eigenschaften von Histidin-Decarboxylase von Micrococcus sp. n]. Eine Abhängigkeit der Fluoreszenzparameter der Histidinedekarboxylase (HDC) von Micrococcuc sp. n. auf pH-Werte wird untersucht. Native HDS hat eine kurzwellige maximale Position (325 nm) und eine kleine Halbbreite des Fluoreszenzspektrums (48 nm). Die Veränderung des Quantenergebnisses der Enzymfluoreszenz war parallel zur Veränderung der enzymatischen Aktivität. Triptophanrückstände von nativem HDC befinden sich in der hydrophobischen Region der Enzymglobula. Die Abhängigkeit der HDC-Floreszenzparameter von pH-Werten in 8 M Urea war ähnlich wie bei freiem Tryptophan. Eine vergleichende Studie der Fluoreszenzparameter von HDC und seinen hemmenden Komplexen mit dem Methylester von Histidin (MEH), Hydroxylamin und P-Chloromercuriumbensoat wird durchgeführt. Die Wirkung von HDC, die mit Inhibitoren interagiert, auf die Fluoreszenzparameter des Enzyms wird diskutiert. Es wurden keine Unterschiede im Infrarotspektrum von HDC und seinem hemmenden Komplex mit MEH gefunden.
[Aktivität der Polynukleotidphosphorylase in der ribosomalen Fraktion der Rattenleber]. Eine Methode zur Isolierung von Polynucleotidephosphorylase (PNPase), die eine Polyribosomfraktion aus Rattenleber enthält, wird beschrieben. PNPase wird in Polyribosomen mit schwachen elektrostatischen Bindungen an RNA gebunden, die leicht in einem schwachen alkalischen Medium mit einer Ionstärke von mehr als 0,1 beta-22P-labelten ADP, GDP, UDP und CDP unter den Produkten der endogenen RNA-Abbau in der Fraktion der gesamten Polyribosomen in Gegenwart von 32P-Orthophosphate gefunden werden. Eine beträchtliche Veränderung der Basiszusammensetzung von PNP-degradiertem RNA wird bei verschiedenen Inkubationszeiten von Gesamtpolyribosomen mit 32P-Orthophosphat beobachtet: Das G+C//A+U-Verhältnis stieg von 2,3 auf 3,1 und das Purine/Pyrimidine-Verhältnis von 0,47 auf 1,06 mit der Zunahme der Inkubationszeit. Die spezifische Aktivität von PNP in Ribosomenfraktionen, die durch Ultrasentrifugation der gesamten Polyribosomen im Saccharose-Dichte-Gradient (0.3-1.0 M) erhalten wurden, stieg in Richtung von der Fraktion der schweren Polysome zu Trimern und Dimern und fiel dann in der Region der Monomere (80 S-Partikel). Die erhaltenen Daten geben keine Möglichkeit, den Typ von PNP-gebundenem RNA in Polyribomen der Rattenleber zu bestimmen.
[Die Wirkung oxidierbarer Substrate und ATP auf die Empfindlichkeit bestimmter energieabhängiger Submitochondrienpartikel gegenüber Phospholipasen A, C und D]. Die Wirkung von NADH, Succinat und ATP auf die Empfindlichkeit einer Reihe von energieabhängigen Funktionen submitochondrialer Partikel ot Phospholipasen A, C und D wurde untersucht. Es wurde gezeigt, dass unter Bedingungen der Oxidation von NADH und Succinat durch Sauerstoff und auch von ATP-Hydrolyse die Abnahme der phosphorylierenden Aktivität der Partikel unter der Wirkung von Phospholipasen C und D beschleunigt. Bei Phospholipase A wurde keine solche Beschleunigung beobachtet.Für zwei weitere Funktionen, d.h. umgekehrte Elektronenübertragung (ATP-abhängige NAD+-Reduktion durch Succinat) und ATP-abhängige Transhydrogenase-Reaktion erwiesen sich die Ergebnisse als unterschiedlich. Oxidierbare Substrate und ATP förderten die Aufrechterhaltung dieser Funktionen in Gegenwart von Phospholipase A, verzögerten jedoch ihre Unterdrückung durch Phospholipasen C und D. Die Auswirkungen von NADH, Succinat und ATP auf die Empfindlichkeit verschiedener energieabhängiger Funktionen submitochondrialer Teilchen gegenüber Phospholipasen A, C und D konnten durch das Entkoppeln des Agenten Carbonyl-Cyanid-m-Chlorophenylhydrazon entfernt werden. Es kommt zu dem Schluss, dass die enthüllten Effekte mit einer Erhöhung der Empfindlichkeit der Kopplungsstellen II PAND/OR III gegenüber Phospholipasen C und D und mit einer Abnahme der Empfindlichkeit der Standorte I und IV gegenüber Phospholipase A auf die Energisierung submitochondrialer Partikel verbunden sind.
Ein Modell für den Ursprung stabiler Protozellen in einem primitiven alkalischen Ozean. Wenn eine Mischung aus den achtzehn proteinreichen Aminosäuren in trockenem Zustand mit Meereswassersalzen angemessen erwärmt wird, ergibt sich eine Kopolyaminsäure. Ein Bruchteil dieses Polymers wird durch isoelektrische Fokussierung gefunden, um aus einer Mischung aus sauren und grundlegenden Proteinoiden zu bestehen, von denen jede eine stark begrenzte Heterogenität hat. Wenn ein Bruchteil des Meereswasserproteinoids in heißem Wasser aufgelöst wird und die Lösung gekühlt wird, entstehen Protein-Mikrosphären. Diese haben Eigenschaften, die mit einfacheren Typen gemeinsam sind, aber auch bei pH-Werten bis 9 stabil sind, gemeinsam mit Mikrosphären, die durch das Mischen von sauren und basischen Proteinoiden vorbereitet werden. Diese Prozesse bilden somit ein einfaches Modell für den Ursprung einer Protozellstabilität in einem primitiven alkalischen Ozean.
Hypothese über die Rolle der ligandierten Zustände von Proteinen in Energietransduktionssystemen. In Energietransduktionssystemen wird vorgeschlagen, dass die Richtung der Energieübertragung durch die synchronisierten Drehungen der Konformationsänderung eines Proteins gehalten wird, das sich zusammenschließt, um ein anderes zu beeinflussen. Die Katalyse durch diese Systeme impliziert daher, dass unter neuen Raumbeschränkungen die Gruppen des transdukierenden Enzyms die Reaktivität untereinander erhöhen und verringern, mit aktivierenden und/oder hemmenden Liganden (H+, H2O, Metalle usw.) und mit den Elektronenschalen der reaktivierenden Moleküle. Der exergonische reaktionsabhängige Umlauf der Formen des Enzyms innerhalb der Übergangskomplexe würde daher unter asymmetrischen Phasenwinkeln konformationsabhängiger Reaktivität aufrechterhalten werden, die die mikroskopische Reversibilität der transdukierenden Systeme effektiv einschränken würden. Einige bekannte Reaktionen, wie Hämoglobin Bohr-Effekt, können verwendet werden, um zu illustrieren, dass mikroskopische (molekulare) Wechselwirkungen, die den thermodynamischen Gleichgewichtsgesetzen unterliegen, ähnlich als treibende Kräfte in Energietransduktionssystemen wirken können. Dies würde die thermodynamische Beschreibung der Rolle der Protontranslokation als eine modifizierende Kraft der strukturellen Parameter von Proteinen ermöglichen. Ebenso wurde die Beziehung zwischen den ligandierten Zuständen des Hämoglobins und seiner Veränderung in der Konformität verwendet, um ein illustratives Modell zu entwickeln, das Veränderungen in der Oxidreduzierung von Elektronenträgern mit induzierten Fit-Effekten bezieht, die zu einer Sequenz von ATPase-Formen in Übergangskomplexen führen, die als hohen Energie-Intermediate unter den Beschränkungen stabilisiert werden, die von der Membran der Energie-Transducierenden Organellen auferlegt werden.
Einige Eigenschaften einer Protease (subtilisin BPN) werden zu porösem Glas immobilisiert. Subtilisin BPN wurde durch Isothiocyanat-Kopplung in poröses Glas immobilisiert. Der optimale pH-Wert des Enzyms wurde auf die alkalische Seite bei der Bindung verschoben. Dieser Effekt war bei Ethyllactat stärker ausgeprägt als bei N-Tosyl-Arginine-Methylester (TAME). Vermutlich ist die Verschiebung eine Reflexion der negativen Ladung auf der Oberfläche des Glases. Die Michaelis-Konstante und die Vmax des löslichen Subtilisin-BPN mit TAME waren zwei und eine Größenordnung niedriger als bei Ethyllactat. Vmax, berechnet pro g des aktiven Enzyms, bei TAME als Substrat wurde von der Immobilisierung nicht beeinflusst, während Vmax bei Ethyllactat mehr als zehnfach abnahm. Die scheinbare KM verringerte sich bei Immobilisierung mit Ethyllactat als Substrat und erhöhte sich bei TAME. Die Ergebnisse werden in Bezug auf die Diffusionsbeständigkeit und eine mögliche Anziehung von Ethyllactat auf die Glasoberfläche erklärt. Die aktive Site-Titration zeigte, dass etwa 25% des immobilisierten Enzyms aktiv waren.
Profile für pH, Temperatur und gelöste O2-Werte in der Enzymproduktion: Überwachung in Kleinfermentatoren. Die auf diese Weise erstellten Profile können für die Untersuchung der Beziehung eines Organismus zu seiner Mikroumgebung einschließlich metabolischer Verschiebungen und Wege verwendet werden. Bereiche der maximalen Atemaktivität, Enzymproduktion, Enzymabbau und Erreichen der stationären Phase sind ziemlich offensichtlich; jedoch können sich Dauer und Größe der verschiedenen Phänomene mit Nährstoff, Temperatur und Belüftungseffizienz ändern. Die praktische Anwendung dieser vereinfachten Methode würde umfassen: a) Bestimmung der Umweltbedingungen, die während des maximalen Wachstums oder der Enzymsynthese bestehen, und Anwendung dieser Bedingungen auf die Rückmeldungskontrolle; b) Schätzung der Anforderungen an pH-, Sauerstoff- und Wärmeabscheidungskapazitäten, die für die Skalierung erforderlich sind; c) spezifische Punkte während der Gärung, an denen Proben analysiert werden sollten, um maximale Informationen über die Erschöpfung von Nährstoffen und ihre Auswirkungen auf die mikrobielle Aktivität zu liefern.
Knochenmarktransplantation für aplastische Anämie von einem HL-A und MLC-ähnlichen unverwandten Spender. Eine Knochenmarktransplantation (BMT) von einem unverwandten, HL-A-Phenotyp-ähnlichen, MLC-negativen Spender wurde bei einer 31-jährigen Frau mit schwerer lang anhaltender aplastischer Anämie durchgeführt. In-vitro-Analysen zeigten keine humorale oder zelluläre Sensibilisierung des Empfängers gegenüber Spender-Antigenen. Nach der Konditionierung mit Cyclophosphamid kam es zu einer sofortigen, aber nur vorübergehenden Eingliederung der Transplantation, begleitet von Anzeichen einer leichten Transplantationsversus-Host-Krankheit (GVHD) der Leber. Die Ergebnisse einer zweiten Knochenmarktransplantation vom gleichen Spender können aufgrund des vorzeitigen Todes des Empfängers nicht bewertet werden. Es wird geschlossen, dass das Knochenmark von unabhängigen, HL-A- und MLC-identischen Spendern ohne schwere GVHD verwickelt werden kann. Die Ablehnung des Transplantats bei unserem Patienten kann mit größeren antigenischen Unterschieden zusammenhängen, die zwischen HL-A und MLC-ähnlichen unverwandten Individuen als zwischen HL-A und MLC-ähnlichen Geschwistern zu erwarten sind. Eine unzureichende vorbereitende Immunsuppression mit Cyclophosphamid aufgrund einer schweren Hämosiderose der Leber erscheint jedoch ebenso wahrscheinlich als Ursache für die Ablehnung von Transplantaten. Das möglicherweise erhöhte Risiko von Transplantatabstoßung oder schwerer GVHD sollte die Verwendung von nicht verwandten HL-A- und MLC-ähnlichen Hirndonoren nicht ausschließen, wenn histokompatible Schwester-Spender nicht verfügbar sind; aber stärkere immunsuppressive Regime als das Cyclophosphamide-Protokoll können erforderlich sein, um eine dauerhafte Eingliederung zu gewährleisten.
Beweise für Noradrenalin und Adrenalin als sympathische Sender im Huhn. 1 Die Konzentrationen von Noradrenalin und Adrenalin in verschiedenen Organen, im arteriellen Plasma und im venösen Ausfluss aus isolierten Herzen von erwachsenen Hühnern wurden bestimmt. 2 Die relativen Adrenalinkonzentrationen (prozentsatz der Summe von Noradrenalin und Adrenalin) im Herzen (33 %), im Milz (16 %) und im Gehirn (26 %) waren höher als in Säugetierorganen. Die chemische Sympathektomie durch Vorbehandlung mit 6-Hydroxydopamin verursachte eine Abnahme der Noradrenalin- und Adrenalinkonzentrationen im Herzen auf 20 % und 23 % bzw. in der Milz auf 16 % und 29 %. 3 Stimulation der rechten sympathischen Nerven, Infusion von Tyramin oder Infusion einer modifizierten Thyrode-Lösung, die 108mM K+ und 44mM Na+ enthielt, verursachte eine Ausgabe von Noradrenalin und Adrenalin in das Perfusat isolierter Herzen. Die relative Adrenalinkonzentration im Perfusat (20-28%) unterscheidet sich nicht signifikant von der relativen Adrenalinkonzentration, die in diesen Herzen verbleibt (19-22%). In den einzelnen Experimenten wurden die Noradrenalin-Adrenalin-Verhältnisse der Stimulationsperfuziate positiv mit den Verhältnissen in den Herzen korreliert. 4 Die Auswirkungen von Noradrenalin und Adrenalin auf die Herzfrequenz und Spannungsentwicklung wurden bei spontanem Schlagen der rechten Vorhaut und der elektrisch angetriebenen linken Vorhaut studiert. Darüber hinaus wurde der Blutdruckanstieg als Reaktion auf Noradrenalin oder Adrenalin bei Hühnern gemessen. Es wurde festgestellt, dass die Herz-Kreislauf-Rate, die Entwicklung der Herzspannung und der arterielle Blutdruck nicht signifikant von dem des Adrenalins unterschieden. 5 Es kommt zu dem Schluss, dass im Hühnerherz und der Milz sowohl Noradrenalin als auch Adrenalin als sympathische Neutrotransmitter wirken.
Antiarrhythmische, hemodynamische und metabolische Wirkungen von 3alpha-amino-5alpha-androstan-2beta-ol-17-one Hydrochlorid bei Grauhunden nach akuter Koronararterienligation. 1 Die antiarrhythmischen, hemodynamischen und metabolischen Wirkungen eines neuen Aminosteroids, ORG6001, wurden bei experimentellen akuten Myokardinfarkten bei anästhetisierten Grauhunden untersucht. ORG6001 entweder intravenös (2-10 mg/kg) oder oral (50 mg/kg) verabreicht signifikant reduziert die Inzidenz von ventrikulären ectopic Beats in den ersten 30 Minuten nach der Ligation der linken vorderen absteigenden koronaren Arterie. Bei Hunden, die mit ORG6001 vorbehandelt wurden, waren die metabolischen Veränderungen, die auf Myokardischämie (Laktatproduktion und Kaliumabfluss) hinweisen, weniger ausgeprägt als bei Kontrolltieren. 4 Antiarrhythmische Dosen von ORG6001 verursachten nur minimale vorübergehende hämodynamische Wirkungen. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass ORG6001 deutliche Vorteile gegenüber gegenwärtig verwendeten antiarrhythmischen Medikamenten bei der Vorbeugung und Behandlung der frühen Arrhythmien haben kann, die nach einem Myokardinfarkt auftreten.
Die Verwendung von radioaktiven Mikrosphären, um die Auswirkungen von Hydralazin, Guanethidin und SK & F 24260 auf die Umverteilung der Herzproduktion bei anästhetischen Kaninchen zu vergleichen. 1 Die Verwendung radioaktiver Mikrosphären wird zur Messung der Herzleistung bei anästhetisierten Kaninchen und ihrer Umverteilung nach Verabreichung von Arzneimitteln beschrieben, die den Blutdruck senken. 2 Hydralazin erhöhte die periphere vaskuläre Leitfähigkeit um 123%. Die Gefäßbetten, in denen es die meiste Wirkung hatte, waren die des Körperkörpers (hauptsächlich Muskel) und der Nieren. 3 SK&F 24260, (1,4 dihydro-2, 6-dimethyl-4(2-trifluoremethylpheny)-3,5,- pyridinedicarboxylic acid diethyl ester), hatte ähnliche vasocilatorische Wirkungen. Seine Wirkung in der Leiche trug relativ mehr zur Erhöhung der gesamten peripheren Leitfähigkeit bei. Es verursachte auch einen bemerkenswerten Grad an Gehirn-Vasodilatation. 4 Guanethidin hatte eine relativ geringe Wirkung auf die gesamte periphere Leitfähigkeit und senkte den Blutdruck hauptsächlich durch die Verringerung des Schlaganfallvolumens und der Herzproduktion.
Auswirkungen psychosozialer Faktoren auf die Durchführung kombinierter Medikamenten- und Psychotherapieforschung. Die Wirkung der Einstellungen von Therapeuten, Patienten und Forschern auf das Verhalten und das Ergebnis der kombinierten Medikamenten- und Psychotherapieforschung wurde in einer kurzen, krisenorientierten Psychotherapieklinik untersucht. Siebzig sieben aufeinanderfolgende Patienten erhielten eine von zwei Anti-Angst-Medikamenten oder ein Placebo in Verbindung mit der typischen psychoanalytisch orientierten Behandlung, die in der Klinik verwendet wurde. Die Einstellungen der Therapeuten, die die Psychotherapie gegenüber der Medikamententherapie (und der Psychotherapieforschung) bevorzugen, wurden den Patienten eindeutig übermittelt. Hinweise darauf sind die folgenden: (a) 82 Prozent der Patienten hörten auf, Medikamente zu nehmen, obwohl ein ähnlicher Prozentsatz in der Behandlung blieb; (b) nur ein Drittel der Patienten empfand es als wichtig für ihre Therapeuten, dass sie Medikamente einnehmen sollten; (c) 87 Prozent der Patienten wurden als verbessert bewertet; und 75 Prozent der Patienten, die Formen abgeschlossen haben, dachten, dass die meisten oder alle ihrer Verbesserungen auf das Sprechen zurückzuführen waren. Das Forschungsteam, bestehend aus Mitgliedern derselben Abteilung, die daher ähnliche Werte wie die Therapeuten hatten, sammelte sorgfältig Ergebnisdaten, ignorierte jedoch seine Verantwortung für die Durchsetzung von Drogenbeziehungsabschnitten des Protokolls. Insgesamt blieben die Patienten in der Therapie, verbesserte sich und nahm an den Abschlussformen teil, so dass nur die Forschungsziele der Kombinationstherapie behindert wurden, während die traditionellen klinischen Service- und Schulungsziele wie gewohnt vorangingen.
Neurochemische Studien bei einem Mausteratom mit neuroepithelialer Differenzierung. Präsenz von zyklischem AMP, Serotonin und Enzymen der serotonergischen, adrenergischen und cholinergischen Systeme. Ein transplantierbares Mäusenteratom (OTT 6050) mit einem Spektrum der neuroepithelialen Differenzierung wurde biochemisch für Konzentrationen von zyklischem AMP (cAMP), Serotonin (5-HT) und Enzymen, die am Metabolismus der biogenen Aminen und Acetylcholin beteiligt sind, ausgewertet. Diese Werte wurden zwischen Teratomen mit neuroepithelialer Differenzierung als Haupt- oder Kleinkomponente und Gehirnen von neugeborenen und erwachsenen Mäusen vergleicht. cAMP, 5-HT, Tryptophanhydroxylase (TPH), aromatische Aminosäure Decarboxylase (AADC) und Monoaminoxidase (MAO) waren vorhanden. Darüber hinaus wurden Enzyme des adrenergischen Systems, d.h. Tyrosinhydroxylase (TH) und Dopamin-Beta-Hydroxylase (DBH), und des Cholinergischen Systems, d.h. Cholinacetyltransferase und Acetylcholinesterase, untersucht. Biochemische Unterschiede in Tumorgruppen spiegelten wahrscheinlich Veränderungen im Anteil der neuroepithelialen Komponenten wider: Trends deuten auf eine Zunahme von cAMP und eine erhöhte Aktivität von TPH, AADC, TH und DBH bei Tumoren mit erhöhten Proportionen von neuroepithelialen Zellen hin. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die neuroepitheliale Komponente des Maustheratoms als Modell für die Untersuchung der neuronalen Differenzierung bei primitiven neuroepithelialen Neoplasmen dienen kann.
Transsynaptische Regulierung der Entwicklung der Endorganinervation durch sympathische Neuronen. Zur Untersuchung der Regulierung der Entwicklung der Endorganinervation wurden das obere Gebärmutterhalsganglion (SCG) und zwei seiner Zielorgane, die Iris und die Pinealdrüse, unter Verwendung biochemischer und histofluoreszierender Ansätze untersucht. Während der postnatalen Ontogenese erhöhte sich die Aktivität der Tyrosinhydroxylase (T-OH), die an adrenergen Neuronen lokalisiert ist, 50-fach in der Iris und 34-fach in den Pinealnervterminalen der Ratte. Diese Erhöhungen verglichen in vitro die Erhöhung der Iris [3H]norepinephrin ([3H]NE) Aufnahme, ein Maß für das Vorhandensein der funktionellen Nerventerminalmembran. Diese biochemischen Indizes der Endorgan-Innervation korrelierten gut mit Entwicklungsanstieg in der Dichte der Innervation, der adrenergischen Bodenplexusverzweigung und der Fluoreszenzintensität von Nervenfasern, wie sie durch Fluoreszenzmikroskopie bestimmt wurden. Die einseitige Transkription der presynaptischen cholinergischen Nerven, die das SCG bei 2-3-tägigen Ratten innervierten, verhinderte die normale Entwicklung der Endorganinervation: T-OH-Aktivität, [3H]NE-Aufnahme, Innervationsdichte, Plexusverzweigung und Fluoreszenzintensität entwickelten sich in den von dezentralen Ganglien innervierten Iriden nicht normal. Es kommt zu dem Schluss, dass transsynaptische Faktoren die Reifung der adrenergen Nervenenden und die Entwicklung der Endorganinervation durch SCG regulieren.
Mechanismus der Wirkung von Mg2+ und Zn2+ auf Rattenplazenta alkalische Phosphatase. I. Studien über die löslichen Zn2+ und Mg2+ alkalischen Phosphatasen. Ratte Plazenta alkalische Phosphatase (EC 3.1.3.1), ein Dimer von 135.000 Daltons, wird stark durch Mg2+ aktiviert. Zn2+ muss jedoch auf dem Apoenzym vorhanden sein, um diese Aktivierung zu erhalten. Mg2+ allein ist nicht in der Lage, funktionelle aktive Standorte wiederherzustellen. Überschüssiges Zn2+, das für den Mg2+-Standort konkurriert, führt zu einer Phosphatase mit geringer katalytischer Aktivität bei alkalischem pH, aber mit normalen aktiven Stellen bei sauerem pH, wie durch die kovalente Einbeziehung von Orto-[32P]phosphat gezeigt. Zwei Enzymarten mit identischen funktionellen aktiven Standorten wurden rekonstituiert, die sich nur durch das Vorhandensein von Zn2+ oder Mg2+ an der Effektorstelle unterscheiden. Es wird ein Mechanismus vorgestellt, durch den die alkalische Phosphataseaktivität der Rattenplazenta durch einen molekularen Prozess kontrolliert wird, der die Wechselwirkung von Mg2+ und Zn2+ mit dem dimerischen Enzymmolekül beinhaltet.
Schweinechymotrypsin A-pi, ein sauereres Chymotrypsin. Eine kinetische Studie von Procin Chymotrypsin A-pi ergab zwei charakteristische Eigenschaften dieser Art von Chymotrypsin: Schweinechymotrypsin A-pi, wie Rinderchymotrypsin B-pi bindet nicht Proflavin, das ein wettbewerbsfähiger Inhibitor von Rinderchymotrypsin und Chymotrypsin A-alpha ist. Die pH-Profile der Steady-State-Parameter zeigen die zwei üblichen wichtigen pKs. Die grundlegende, pK2 = 9,6, betrifft sowohl Km als auch kcat/Km und kontrolliert wahrscheinlich die Bindungskonfiguration von Chymotrypsin. Die saure, pK1 = 5,7, wirkt sich auf kcat und kcat/Km aus und spielt eine Rolle im katalytischen Prozess. Der Wert von pK1 ist ungewöhnlich niedrig.
Eigenschaften einer freien und einer gelösten Form von gebundenem Alpha, Alpha-Trehalase, gereinigt aus Honigbiene Thorax. Die freien und gebundenen Formen der Alpha-Alpha-Trehalase (EC 3.2.1.28) der Honigbienenbrust wurden getrennt und das gebundene Enzym wurde durch Erhöhung des pH-Wertes auf 8,0 für 10 h aufgelöst. Sie waren homogen, wie durch mehrere elektrophoretische Kriterien bestimmt. Es wurde festgestellt, dass die beiden Enzyme sehr ähnliche Km's (jeweils etwa 0,89 mM), Vm's (53,2 und 54.3 U / mg für frei und gelöst, jeweils), Hemmungsmerkmale, Spezifikationen (beide nur hydrolysiert alpha, alpha-trehalose), pH-Maximale (jeder hatte Höchstwerte bei etwa 3,5 und 6,5), Molekulargewicht (65.000), isoelektrische Punkte (5.1), Reaktivitäten zu sulfhydryl Reagenzien, elektrophoretische Mobilitäten, Aktivierungsenergien (etwa 12,8 kcal / mol), und ähnliche Stabilitäten zu Wärme, pH und Harnstoff. Einige signifikante Unterschiede zwischen den beiden Enzymen wurden jedoch gefunden: die gelöschte alpha, alpha-trehalase schwamm bei 70% Sättigung von Ammoniumsulfat, während die freie alpha, alpha-trehalase nicht; die gelöschte alpha, alpha-trehalase dissociierte nicht so leicht in Untereinheiten wie das freie; und die gelöschte alpha, alpha-trehalase wurde gefunden, sich leichter an eine hydrophobe Gruppierung als das freie Enzym zu binden. Zusätzlich zu diesen Vergleichen werden drei neue Ergebnisse im Zusammenhang mit Thorax alpha,Alpha-Trehalasen berichtet. (1) Thorax alpha,Alpha-Trehalasen werden stark durch Beta-Glukoside (Ki-Werte von etwa 8 x 10(-4) M) gehemmt; (2) unter bestimmten Bedingungen Thorax alpha,Alpha-Trehalasen von Honigbienen in Subeinheiten von einer Hälfte des normalen Molekulargewichts dissociiert; (3) Honigbiene Thorax alpha,Alpha-Trehalasen haben ungewöhnliche biphasische pH-Aktivitätsprofile.
Immuntherapie gegen Krebs: eine Übersicht. Die Immuntherapie von Krebs ist von Interesse für Onkologen, weil sie speziell auf Krebszellen gerichtet ist und normale Zellen schützt. Obwohl es bei den meisten Patienten, insbesondere bei Patienten mit weit verbreiteten metastatischen Erkrankungen, unwirksam ist, liefert es gelegentlich gute Ergebnisse. Jede der verfügbaren Methoden hat inhärente Probleme und in letzter Zeit wurden Versuche unternommen, einige davon zu überwinden. Es gibt einen starken Fall für kleine experimentelle Studien in hoch ausgewählten Gruppen von Patienten, die intensiv auf ihren immunologischen Status in Bezug auf ihren Tumor untersucht werden. Trotz des Mangels an Erfolg im Allgemeinen scheint die Immuntherapie immer noch eine Zukunft als Ergänzung zur bestehenden Therapie zu haben, um so viel zu kontrollieren, wie Resttumor zu heilen.
Antitumor- und immunsuppressive Aktivitäten von Antibiotika der Lankacidin-Gruppe: Struktur-Aktivitätsbeziehungen. Die antitumor- und immunsuppressive Aktivität der Antibiotika der Lankacidin-Gruppe wurden bei Mäusen untersucht. Siebzehn von 29 neu zubereiteten Antibiotika der Lankacidin-Gruppe, darunter 14-Derivate von Lankacidin C, Lankacidinol, Isolankacidinol und Lankacidinol 14-Acetat, besaßen eine beträchtliche antitumorale Aktivität gegen Ascites 6C3HED/OG Lymphosarkom. Vergleichende Studien über die antitumorale Aktivität von Lankacidin C und acht seiner Derivate gegen L1210-Leukämie und festes 6C3HED/OG-Lymphosarkom zeigten, dass die Ersetzung der Hydroxylgruppe in Position 8 oder 14 von Lankacidin C durch eine Acyloxy-Gruppe die antitumorale Aktivität verstärkte. Diese Modifikationen von Lankacidin C führten jedoch zu einer Verringerung der immunsuppressiven Aktivität.
L-[alphaS, 5S]-alpha-amino-3-chloro-4,5-dihydro-5-isoxazoleacetic Säure (NSC-163501): ein neues Aminosäure-Antibiotikum mit den Eigenschaften eines Antagonisten von L-Glutamin. L-[alphaS,5S]-alpha-amino-3-chloro-4,5-dihydro-5-isoxazoleinsäure (NSC-163501), ein von Streptomyces sviceus entwickeltes Antibiotikum, hat sich als ein starker Inhibitor vieler Säugetier- und bakterieller Reaktionen erwiesen, die die Übertragung von Stickstoff aus dem Gamma-Carboxamid von L-Glutamin beinhalten. So wird die Verwendung von L-Glutamin für die Synthese von Carbamylphosphat, L-Asparagin, Guanosin-5'-Monophosphat, Cytidin-5'-Triphosphat, N-Formylglycinamidine Ribonucleotide, NAD, Glucosamin-6-Phosphat und Anthranylsäure stark oder vollständig durch eine Konzentration von NSC-163501 von 1 X 10(-3) M. L-Glutamat-Synthase von Escherichia coli nur bescheiden hemmt und 5-Phosphoribosylamin-Synthese in fetaler Rattenleber ist vergleichsweise refraktorisch zur Hemmung. NSC-163501-Behandlung von L1210-Zellen, die in einem niedrigen L-Glutamin-Kulturmedium wachsen, führte zu einer Verstopfung in der G- oder frühen S-Phase. Von den getesteten Aminosäuren hat nur L-Glutamin eine solche Wachstumshemmung angegriffen.
Beweise für eine physiologische Rolle der renalen sympathischen Nerven bei der adrenergen Stimulation der Reninfreisetzung bei Ratten. Frühere Studien zur Freisetzung von Renin durch ein In-vitro-System von Rattennervenscheiben, das keine hämodynamischen Einflüsse hat, haben Beweise dafür geliefert, dass die Freisetzung von Renin durch einen beta-adrenergen Mechanismus stimuliert wird. Wir verwendeten dieses System, um die Auswirkungen von Tyramin (ein indirekt wirksames Amin, das in der Lage ist, endogene Katecholmine von sympathischen Nervenenden zu verschieben) auf die Freisetzung von Renin zu untersuchen. Tyramin (10(-3)M) in Gegenwart eines Monoaminoxidase-Inhibitoren (Pheniprazin, 10(-5)M) und eines Phosphodiesterase-Inhibitoren (Theophyllin, 10(-3)M) signifikant (P weniger als 0,01) stimuliert Renin Freisetzung, wenn Werte verglichen wurden mit Kontrollbeobachtungen für Medien, die nur die Inhibitoren enthalten. Die durch Tyramin induzierte Stimulation der Reninfreisetzung wurde durch den Beta-Blocker Propranolol (2 X 10(-4) M) und den neuronalen Absorptionsblocker Kokain (10(-5) M) blockiert, aber nicht durch den Alpha-Antagonisten Phentolamin (9 X 10(-4) M). Diese Beobachtungen zeigen eine mögliche Rolle für die sympathische Innervation des juxtaglomerulären Apparates bei der Reninfreisetzung.
Auswirkungen der Lagerung in der Kälte auf die Aktivität von Gamma-Glutamyltransferase im Serum. Serum von Patienten mit hepatobiliären Erkrankungen wurden ausgewählt, um eine breite Palette von Gamma-Glutamyltransferase-Aktivität zu repräsentieren (EC 2.3.2.2). Die Proben wurden bei 4 Grad Celsius gelagert und periodisch bis zu neun Wochen getestet, andere bis zu 40 Wochen bei -6 Grad Celsius. Die gefroren gespeicherten Proben wurden aufgelöst und dann nach jedem Test erneut eingefroren. Die Aktivität des Enzyms blieb unter beiden Lagerungsbedingungen im Wesentlichen unverändert. Diese Ergebnisse stimmen mit den Kommentaren in der Literatur über die Stabilität des Enzyms überein.
Quantitative Fraktionierung der alkalischen Phosphatase-Isoenzyme entsprechend ihrer Thermostabilität. Die kontinuierliche Überwachung der Wärmednaturation einer Mischung aus alkalischen Phosphatase-Isoenzymen bei 60 Grad C und pH 7.5 ermöglicht die gleichzeitige direkte Identifizierung und Quantitation von drei Isoenzymen: dem Plazentaisoenzym, dem L-Phenylalanin-empfindlichen Darmisoenzym und dem Leberisoenzym (hepatocytisch). Das Isoenzym, das hauptsächlich aus Knochen stammt, kann ohne die Hilfe anderer diagnostischer Hilfsmittel und der Krankengeschichte des Patienten nicht als solches identifiziert werden. Alle menschlichen Gewebe enthalten alkalische Phosphatase, viele Organe mehr als eines der Isoenzyme. Leberalkalische Phosphatase, die 40-50% der normalen Serumalkalische Phosphatase-Aktivität ausmacht, wurde im Serum von Personen mit verschiedenen Lebererkrankungen gemessen. Seine Aktivität überschritt die Norm bei allen Arten von Lebererkrankungen; in 80% der Fälle war dieser Anstieg von einer erhöhten Gamma-Glutamil-Transferase-Aktivität begleitet, aber die quantitative Korrelation (r = 0,54) war nicht so gut wie erwartet, wenn beide Enzyme aus der gleichen Quelle stammen und Indizes von Leberdiasen sind. Leber alkalische Phosphatase-Aktivität steigt im Blut früh in Lebererkrankungen, bevor die meisten Leber-Tests zeigen Anomalien. Das andere große Isoenzym des normalen Serums ist wahrscheinlich eine Mischung aus Isoenzymen aus Knochen- und Reticuloendothelial- und Gewebe, die alle die gleiche "sehr heiß-label" alkalische Phosphatase enthalten. Kernblut und Kinderserum enthalten hauptsächlich dieses sehr heißverträgliche Isoenzym.
Spektrophotometrische Endpunktmethode zur Analyse der Serum-Cystylaminopeptidase in der Schwangerschaft. Eine optimierte Endpunktmethode, die wenig anspruchsvolle Ausrüstung erfordert, wird für die Schätzung der Serum-Cystylaminopeptidase während der Schwangerschaft beschrieben. S-Benzyl-L-Cystein-4-Nitroanylid wird als Substrat verwendet.
Verbesserte Trennung des Kreatinkinase-Herzisoenzyms im Serum durch Batchfraktionierung. Ich beschreibe ein einfaches, single-tube-batch-fraktionationsverfahren zur Trennung von MM- und MB-Isoenzymen der Kreatinkinase auf einem makroporösen starken Anionenaustauschmittel (AG MP-1, Bio-Rad Laboratories). Die Isoenzyme können in weniger als 3 Minuten getrennt werden, wodurch das Serum mit nicht mehr als einem gleichen Puffervolumen verdünnt wird. Ohne Probenkonzentration oder spektrofluorometrische Messung erkennt das Verfahren 4 U von MB Isoenzym pro Liter. Die Empfindlichkeit ist durch die Empfindlichkeit und Präzision der Messmethode begrenzt. Der Lebenslauf für die Fraktionierung kann bei weniger als 4,0 % bei 65 U von MB pro Liter gehalten werden. Die derzeitigen Fraktionierungsmethoden werden mit dem vorgeschlagenen Verfahren verglichen. Bei Verwendung eines diskreten Analysators (Du Pont aca) betrug die durchschnittliche MB-Aktivität in einer Population ohne Herzerkrankungen 3,2 +/- 3,0 U/Liter (Bereich, 0 bis 8 U/Liter). Die Kinetik und Stabilität der isolierten Isoenzyme werden berichtet, was darauf hinweist, dass die Lagerung oder die Vorinkubation von Proben mit Mercaptoethanol ratsam ist.
Die Abhängigkeit der Tryptamin-Exkretion vom pH-Wert des Urins. Es wurde gezeigt, dass Tryptamin im Urin signifikant abnimmt, wenn der pH-Wert im Urin steigt. Dieser Effekt wird bei einem pH-Wert im Urin von 6,5 und höher wichtig.
Ein stabilisierender Faktor für Gamma-Glutamil-Transpeptidase im Urin. Urin-Gamma-Glutamil-Transpeptidase (Gamma-GT) wurde bei Raumtemperatur und 4 Grad C. Aktivität ist schnell verloren, wenn Urin eingefroren wird, aber vorherige Dialyse wird diesen Verlust verhindern. Urea ist der Hauptfaktor für den Verlust der Aktivität; Albumin ist bei Konzentrationen von 6 g / l oder mehr schützend. Ein Faktor von 10 000-30 000 Molekulargewicht, der den Verlust der Urin-Gamma-GT-Aktivität beim Einfrieren verhindern wird, wurde im Serum und im Urin gefunden; es hat eine hohe Potenz im Serum und im Urin von Patienten mit chronischem Nierenversagen, aber nur eine geringe Potenz im normalen Urin. Sein Charakter ist unbekannt, aber es ist thermisch stabil.
Eigenschaften der Beta-Glucuronidase-Aktivität in menschlicher Synovialflüssigkeit. Ziel der vorliegenden Studie war es, die Eigenschaften von Beta-Glucuronidase (EC 3.2.1.31) in der menschlichen Synovialflüssigkeit zu bewerten. Es wurde gezeigt, dass es eine pH-Anforderung von 5.0 und einen KM-Wert von etwa 8.0 - 10(-3) M mit Phenolphthalein Beta-Glucuronid als Substrat hat. Bei niedrigen Substratkonzentrationen ist ein endogener Inhibitor nachweisbar. Die Hemmung ist des wettbewerbsfähigen Typs und wird durch die proteolytische Verdauung der Synovialflüssigkeit entfernt, während die Verdauung der Hyaluronidase und die Zugabe von Triton X-100 oder verschiedenen Salzen zur Assay-Mischung unwirksam sind. Die Möglichkeit, dass der Inhibitor ein Protein aus Serum ist, wird diskutiert.
Glucose-Phosphat-Isomerase-Mangel aufgrund einer neuen Variante (GP I Barcelona) und einem stillen Gen: biochemische, immunologische und genetische Studien. Ein 12-jähriges Mädchen spanischer Herkunft wurde als doppelt heterozygot für eine mangelhafte GP I-Variante (GP I Barcelona) und für ein stilles GP I-Gen festgestellt. Die Mutter war für den GP I Barcelona heterozygot und der Vater für das stillschweigende Gen heterozygot. GP I Barcelona war eine schnelle Variante (116%) mit einem erhöhten isoelektrischen Punkt (9.55), Labilität für Wärme und Urea und einer Verschiebung der pH-Kurve in Richtung saurer pH. Die anderen kinetischen Merkmale waren normal. Das Verhältnis der enzymatischen Aktivität zur immunologischen Reaktivität war normal in den Erythrozyten und weißen Blutkörperchen des Vaters und der Mutter, aber sinkt auf 75% des normalen in den Blutkörperchen der Tochter. Die genetischen und molekularen Mechanismen des GP I-Mangels dieses Patienten werden diskutiert.
Rosettenbildung durch Mauslymphozyten. Fc- und C3-Rezeptoren treten zusammen und getrennt auf T-Zellen und anderen Leukozyten auf. Eine Methode wird beschrieben, um das gleichzeitige Vorhandensein von Fc- und C3-Rezeptoren auf Mausschleimzellen zu erkennen. Ein Anteil von T-Zellen und Nicht-T-Zellen trägt beide Rezeptoren. Sowohl T-Zell- als auch nicht-T-Zell-Fc-Rezeptoren wurden von aggregierten Maus IgG2 in gleicher Weise blockiert. C3, aber nicht Fc-Rezeptoren wurden durch Faktoren blockiert, die im Serum von bestrahlten Mäusen oder Mäusen vorhanden waren, die einer Implantat-versus-Host-Reaktion unterzogen wurden. Thymocyten, die durch Injektion in bestrahlte F1-Hybridmäuse aktiviert wurden, und Thymocyten, die nach Bestrahlung und Knochenmark-Injektion regenerierten, schienen Fc-Rezeptoren zu haben. Eine allgemeine Rolle für Fc und C3-Rezeptoren in der T-Zell-B-Zell-Kooperation wird vorgeschlagen.
Fluroxen-induzierte Toxizität durch Phenobarbital. Aufgrund von Berichten über die Toxizität von Fluroxen beim Menschen wurde die Wirkung der phenobarbital-Behandlung auf die Toxizität und den Stoffwechsel von Fluroxen bei 9 Rhesus-Affen untersucht. Sechs Affen, die einer durchschnittlichen berechneten alveolaren Fluroxinkonzentration von 5,8 % für 4-Stunden bis zu insgesamt 16 Std. ausgesetzt waren, zeigten keine Beweise für eine Toxizität. Zwei Tiere wurden nach einer einmaligen 4-Stunden-Exposition geschlachtet, um Kontrollmaßnahmen für Fluroxen-Metaboliten im Gewebe zu erhalten. Vier Affen, die zuvor überlebt hatten, erhielten Exposition gegenüber Fluroxen und 3 Affen, die keine Exposition gegenüber Fluroxen hatten, starben während der Fluroxen-Anästhesie nach der Behandlung mit Phenobarbital (durchschnittliche Zeit, 3 Stunden). Die Toxizität manifestierte sich durch arterielle Hypotonie, Lungenödem und arterielle Hypoxämie. Die Behandlung mit Phenobarbital verstärkte die Produktion von Fluroxen-Metaboliten, einschließlich des hochgiftigen Trifluorethanols. Die Konzentrationen von Trifluorethanol in gemischten abgelaufenen Gasen, Blut und Urin sowie des Gesamtfluorins in Blut, Urin und Gewebe von mit Phenobarbital behandelten Tieren waren 2 bis 10 mal so hoch wie bei Kontrolltieren. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass der Rhesus-Affe ein wertvolles Modell für die Untersuchung der Pharmakologie von Fluroxen ist und dass die Einbeziehung einer enzyminduzierenden Herausforderung bei der Beurteilung der potenziellen Toxizität anderer Anästhetika gerechtfertigt erscheint.
Plasmakonzentrationen und der Zeitverlauf der Beta-Blockade aufgrund von Propranolol. Die Wirksamkeit von intravenös verabreichtem Propranolol bei der Antagonisierung der chronotropen Wirkung von Isoproterenol und Bewegung wurde untersucht und wurde zu allen Zeiten als eine vorhersehbare Funktion seiner Plasmakonzentrationen nach der klassischen Medikamenten-Rezeptor-Theorie für Wettbewerbsantagonismus festgestellt. Die Daten zeigen weiter, dass die Beziehung zwischen Effizienz und Zeit von der Art und Weise abhängt, wie der Antagonismus gemessen wird. Wenn das Dosisverhältnis zu Isoproterenol (DR) gemessen wird, sinkt (DR-1) im Laufe der Zeit parallel zur Arzneimittelkonzentration. Andererseits, wenn die Wirkungen von Propranolol als Prozentsatzreduktion in einer gegebenen Reaktion gemessen werden, dann nimmt dies mit der Zeit linear ab, obwohl die Plasmakonzentrationen exponentiell sinken. Diese Tatsache erklärt, warum in der Vergangenheit Verwirrung über die Beziehung zwischen der Dauer der Beta-Blockade und der pharmakokinetischen Halbwertszeit entstanden ist.
Bewertung von Lorazepam und Pentobarbital als chirurgische Prämedikamente. Lorazepam, ein neues Benzodiazepin, wurde mit einem Standard-chirurgischen Prämedikament, Pentobarbital, verglichen. In einer doppelblinden Studie mit 128 Patienten wurden Lorazepam 2 und 4 mg und Pentobarbital 50 und 100 mg intravenös in einer randomisierten Reihenfolge verabreicht. Signifikante Unterschiede wurden beobachtet; Lorazepam wurde gefunden, um größere Sedation, Mangel an Rückruf und größere Anti-Angst-Effekt als Pentobarbital zu liefern. Es wurden keine signifikanten Nebenwirkungen nach beiden Medikamenten beobachtet. Die lebenswichtigen Zeichen blieben stabil.
Die renale Elimination von Procainamid. Die Frage der pH- oder Flussabhängigkeit für die renale Elimination von Procainamid (PCA) wurde unter 4 Bedingungen in jeder der 4 Probanden untersucht. Jedes Subjekt erhielt 500 mg PCA intravenös in wöchentlichen Abständen während in einem Zustand von (1) Säurebelastung (NH4Cl) und Wassermangel, (2) Säurebelastung und überschüssiges Wasser, (3) alkalische Belastung (NaHCO3) und Wassermangel und (4) alkalische Belastung und überschüssiges Wasser. Plasma und Urin wurden in häufigen Abständen für die Analyse von PCA und N-Acetyl-PCA (NAPA) gesammelt. Die Urinflussraten variierten deutlich zwischen den Wassermangel- und überschüssigen Zuständen (rund 1,2 vs. 5 ml/min) und der Urin-PH variierte deutlich zwischen den Säure- und alkalischen Ladezuständen (pH = ca 5 vs. 8). Trotz dieser signifikanten Variation gab es keine signifikanten Veränderungen in der PCA renalen Clearance oder 24-hr PCA oder NAPA Ausscheidung. Wenn die passive Diffusion von PCA stattfand, hätten solche Durchfluss- und pH-Veränderungen signifikante Veränderungen in der PCA-Clearance verursacht, wenn die pH-Partition-Hypothese wahr wäre. Wir schließen daher, dass die passive Diffusion kein wichtiger Mechanismus bei der renalen Beseitigung von PCA beim Menschen ist und dass es eine tubuläre Sekretion geben muss. Die Implikation für die klinische Anwendung des Arzneimittels ist, dass keine Dosisanpassungen als Reaktion auf Veränderungen des Urinflusses und des pH-Wertes vorgenommen werden müssen.
Saisonale Veränderungen in der Zusammensetzung des Urins in Bezug auf die Kalziumsteinbildung. Eine retrospektive Querschnittsstudie wurde anhand von Daten durchgeführt, die aus einzelnen 24-Stunden-Urin-Sammlungen von 246 männlichen idiopathischen Kalziumsteinbildern gewonnen wurden. Das tägliche Urinvolumen und der pH-Wert sowie die Ausscheidungen von Calcium, Oxalat, Phosphat, Kreatinin und Magnesium waren mit der Jahreszeit verbunden, als der Urin gesammelt wurde, und die Sättigung des Urins mit Calcium-Oxalat und Octocalciumphosphat wurde für jeden Monat berechnet. Es gab signifikante saisonale Abweichungen in der Urinabscheidung von Calcium und Oxalat, die jeweils im Sommer ein Maximum und im Winter ein Minimum zeigten. Es gab keine signifikanten saisonalen Veränderungen im pH-Wert, Volumen, Kreatinin, Phosphat oder Magnesium im Urin. Es gab einen signifikanten Anstieg der Sättigung des Urins mit Calciumoxalat und einen Trend zu höheren Sättigungswerten von Octo-Calciumphosphat im Sommer. Diese Veränderungen waren nur abhängig von der saisonalen Variation von Urinkalzium und Oxalat und nicht vom Urinvolumen. Eine retrospektive Studie der saisonalen Inzidenz von Steinepisoden unter diesen 246 Steinbildern zeigte, dass die Rate der Steinpassage pro Monat im Sommer 50% höher war als im Winter. Es gab keine signifikante saisonale Variation in der Inzidenz von steinen, die chirurgisch entfernt wurden.
Probleme der Pathogenese, Kliniken und Therapie der Panarteritis der Aorta und ihrer Zweige. 138 Patienten mit Panarteritis der Aorta und ihrer Zweige wurden untersucht und die klinischen und morphologischen Ergebnisse verglichen. Die Krankheit ist weit verbreitet, als bisher angenommen wurde, und ist häufiger bei jungen Frauen. Die Lokalisierung des Prozesses in der Bauch-Aorta mit Beteiligung (Stenose) der Nierenarterien verursacht renovaskuläre Hypertonie, die oft einen malignen Verlauf hat, insbesondere bei einer ambilateralen Erkrankung der Nierenarterien. Bei der Behandlung sind wiederholte therapeutische Kurse mit Kortikosteroiden und Heparin von grundlegender Bedeutung. Bei einer isolierten Erkrankung, insbesondere bei renovaskulärer Hypertonie und Störungen der Gehirnzirkulation, ist auch eine chirurgische Behandlung indiziert.
Lorazepam und Diazepam bei der Behandlung von neurotischer Angst: eine doppelblinde Studie. 58 neurotische Patienten mit starker Angstzuständen wurden entweder mit Lorazepam oder Diazepam in einer doppelblinden Zwischenpatientenstudie behandelt. Statistische Analysen zeigten, dass die beiden Gruppen vor der Behandlung homogen waren und dass die Behandlungsergebnisse für beide Medikamente ähnlich waren. Nach der globalen Bewertung der Krankheit von Woche zu Woche waren nach vier Behandlungswochen mehr Patienten mit Lorazepam als mit Diazepam normal oder hatten eine leichte Krankheit (82,1% vs. 70,8%). Nach Einschätzung der Forscher hatten 71,9% der mit Lorazepam behandelten Patienten eine ausgezeichnete oder gute Reaktion im Vergleich zu 56,7+ der mit Diazepam behandelten Patienten. Die durchschnittliche Reduktion der Punktzahl auf der Hamilton Anxiety Scale betrug 17,7 für Lorazepam und 16,5 für Diazepam. Keine der oben genannten Unterschiede in den Ergebnissen waren jedoch statistisch signifikant. Die größte Dosis von Lorazepam, die bei der Behandlung benötigt wurde, betrug 6 mg, verglichen mit 30 mg Diazepam. Zwei Patienten, die mit Lorazepam behandelt wurden, hatten Nebenwirkungen, im Gegensatz zu sechs Patienten mit Diazepam. Sechs Patienten in der Diazepam-Gruppe beendeten die Studie nicht, darunter drei, die aufgrund von Nebenwirkungen (Rachen, Zittern, Erregung) abgebrochen wurden; keine Patienten in der Lorazepam-Gruppe fielen aus.
Identifizierung und urinäre Ausscheidung von P-Chlorophenoxyacetamid, einem Metaboliten von Iproclozid, beim Menschen. Das Vorhandensein von p-Chlorophenoxyacetamid wurde im Urin eines Mannes nachgewiesen, der Iproclozid [1-(p-Chlorophenoxyacetyl)-2-Isopropylhydrazin] erhielt. Dieser neue Metabolit wurde durch kombinierte gas-flüssige Chromatographie-Massenspektrometrie und durch den Vergleich mit der synthetischen Verbindung identifiziert. Es wurde ein geeignetes Verfahren für die Extraktion und Quantifizierung von P-Chlorophenoxyacetamid durch Gas-Flüssigkromatographie auf einer 5% OV-225-verpackten Spalte mit dem 2-Butyl-Analogon von Iproclozid als internen Standard entwickelt. Nach 20- und 50-mg einmaligen oralen Dosen von Iproclozid wurden 5,2 und 8,3% im Urin innerhalb von 30,5 und 36 Stunden langsam als P-Chlorophenoxyacetamid ausgeschieden. bzw. entsprechend Nach einer oralen Einnahme von 20 mg durch psychiatrische Patienten betrug die 24-Stunden-Urin-Exkretion von P-Chlorophenoxyacetamid etwa 2-4% der verabreichten Iproclozid-Dosis.
Gewebe Metaboliten von Trifluorperazin, Fluphenazin, Prochlorperazin und Perphenazin. Kinetik in der chronischen Behandlung. Die wiederholte orale Behandlung von männlichen Ratten mit Piperazin-ersetzten Phenothiazin-Medikamenten in Dosen von 25 mg/kg oder mehr täglich führte zu einer Ansammlung von Metaboliten, die eine Ethylenediamin-Gruppe anstelle des Piperazin-Rings enthielten. Diese Produkte des Ringabbaus mit und ohne Entfernung der N-Alkylgruppe wurden zusammen mit den Elternarzneimitteln und ihren N-dealkylierten Metaboliten in Leber, Lunge, Nieren und Milz sowie im Gehirn gefunden, wenn hohe Dosen verabreicht wurden. Nach Beendigung der Behandlung wurden die Ethylenediamin-Derivate langsamer ausgeschieden als ihre kongenerischen Inhaltsstoffe, die den intakten Piperazinkreis enthielten. Parallele Beobachtungen wurden bei Hunden durchgeführt, die Fluphenazin in täglichen Dosen von bis zu 40 mg/kg erhielten. Quantitative Unterschiede wurden in den relativen Mengen der mono- und disubstituierten Ethylenediamin-Metaboliten beobachtet, die sich während der Behandlung mit den verschiedenen Arzneimitteln in Rattengewebe angesammelt haben; Der Anteil des monosubstituierten Produkts, der durch N-Dealkylierung und Ringspaltung gebildet wurde, verringerte sich in der folgenden Reihenfolge: Perazin, Prochlorperazin, Trifluoperazin, Fluphenazin, Perphenazin. Die Kondensationsprodukte der Ethylenediamin-Derivate mit Formaldehyd wurden im verwendeten Extraktionsverfahren aufgeteilt.
Vergleichende Biotransformation von Triflubazam bei Ratten, Hunden und Affen. Die Biotransformation von 14C-Triflubazam (ORF 8063; 1-methyl-5-phenyl-7-trifluoromethyl-1H-1,5-benzodiazepin-2-4-[3H,5H]-dione) wurde bei Ratten, Hunden und Affen untersucht. Die Urinmetaboliten, die 65, 74 und 87 % der durch diese drei Arten ausgeschiedenen gesamten Urinradioaktivität ausmachen, wurden durch vorbereitende Schichtchromatographie isoliert und zeichneten sich durch verschiedene Spektraltechniken aus, darunter Gaschromatographie/Massenspektrometrie, Solidsonde-Massenspektrometrie, Polarimetrie sowie Infrarot- und Kernmagnetresonanzspektrometrie. Kein Arzneimittel wurde im Urin einer Spezies gefunden. Vier Metaboliten wurden von der Ratte einschließlich der 4'-Hydroxyphenyl, Dihydrodiol und 3'-Metoxy-4'Hydroxy Derivate isoliert. N-demethylierte Metaboliten wurden nicht aus Rattenurin isoliert. Fünf Metaboliten wurden aus dem Urin des Hundes isoliert, darunter 4-Hydroxyphenyl, Dihydrodiol und catecholische Derivate von Triflubazam. Im Gegensatz zum Fall der Ratten wurde im Urin des Hundes kein Katechol-O-Methylether nachgewiesen. Sechs Metaboliten wurden aus dem Urin von Affen isoliert. Der einzige wesentliche Unterschied im Stoffwechsel bei den Affen war das Vorhandensein sowohl der Dihydrodiol- als auch der N-Desmethyldihydrodiol-Metaboliten. Kein Katechol-0-Methylether wurde im Urin von Affen nachgewiesen. Biotransformation durch ein gemeinsames Arena-Oxid-Intermediat kann für diese drei Tierarten vorgeschlagen werden.
Physiologische Disposition und Metabolismus von 5- (2',4'-difluorophenyl)salicylsäure, einem neuen Salicylat. 5-(2'4'-Difluorophenyl) [carboxy-14C] Salicylsäure (MK-647) wurde bei Ratten, Hunden und Menschen schnell und vollständig absorbiert. Spitzenwerte der Plasma-Radioaktivität traten innerhalb von 1-2 Stunden nach der oralen Verabreichung auf. Die Dosis betrug 10 mg/kg bei Ratten und Hunden und 50 oder 500 mg beim Menschen. Der größte Teil des Medikaments im Plasma war intakt MK-647, das weitgehend an Plasmaproteine gebunden war. Bei Menschen war die Spitzenkonzentration nach der Dosis von 500 mg etwa 10-mal höher als nach der niedrigeren Dosis, was darauf hindeutet, dass die Absorptionsraten beider Dosen ähnlich waren. Die Beseitigung des Arzneimittels aus dem Plasma war dosisabhängig. Der Bereich unterhalb der Kurve für MK-647-14C im Plasma war nach der Dosis von 500 mg 18 mal höher als bei der Dosis von 50 mg. Hunde, die 10 mg/kg oral oder intravenös verabreicht hatten, trennten 44% der Dosis im Urin und 42% im Stuhl innerhalb von 72 Stunden aus. Bei Ratten, denen die gleiche Dosis auf beiden Verabreichungswegen verabreicht wurde, wurden 80% im Urin und 11% im Stuhl ausgeschieden. Bei Männern wurden ungefähr 95 % der oralen Dosis von 50 oder 500 mg im Urin und 3 % im Stuhl in 96 h ausgeschieden. MK-647 und zwei Metaboliten waren im Urin von drei Arten vorhanden. Die Ether- und Esterglucuronide wurden im menschlichen Urin identifiziert. Der letztere Metabolit wurde auch im Urin von Ratten und Hunden identifiziert. Das Glycin-Konjugat von MK-647 wurde im Urin der drei Arten nicht beobachtet. Keine Wechselwirkungen zwischen MK-647 und Bishydroxycoumarin wurden im Prothrombin-Zeit-Test oder mit Tolbutamid im Glukosetoleranz-Test beobachtet. Eine signifikante Verringerung der Hexobarbital Schlafzeit wurde bei weiblichen, aber nicht männlichen Ratten nach vier aufeinanderfolgenden Tagesdosen von MK-647 beobachtet. Nach wiederholter täglicher Verabreichung von MK-647 (12,5 bis 100 mg/kg) änderte sich der Tagesplasmaspiegel bei Hunden nicht signifikant, was darauf hindeutet, dass keine Sättigung, Induktion oder Hemmung seines eigenen Stoffwechsels stattgefunden hat.
Spironolakton-Metabolismus beim Menschen untersucht durch Gaschromatographie-Massenspektrometrie. Gaschromatographie-Massenspektrometrie wurde verwendet, um Metaboliten von Spironolakton im menschlichen Blut und Urin zu identifizieren. Bei drei gesunden Männern wurden etwa 20% der Radioaktivität innerhalb von 24 Stunden nach einer oralen Dosis von [20-3H]spironolakton (200 mg + 200 muCi) im Urin ausgeschieden. Etwa die Hälfte dieser Radioaktivität wurde mit Chloroform bei pH 3 extrahiert und aus diesem Extrakt wurden vier stabile Metaboliten durch Verwendung von Spalten- und Dünnschichtchromatographie isoliert. Zwei davon waren die zuvor identifizierten Metaboliten, Canrenon (VII; 2,9% der Dosis) und das 6beta-Hydroxy-Sulfoxid (X; 1,8% der Dosis). Die verbleibenden Metaboliten waren die neuen Metaboliten 15alpha-Hydroxycanrenone (XI; 0,8% der Dosis) und die 6beta-Hydroxy-Thiomethyl-Derivate (VI; 0,5% der Dosis). Der wichtigste wasserlösliche Urinmetabolit war Canrenoatester-Glucuronid (XII; 4,5 % der Dosis). Im 24- bis 32-hr-gesammelten Serum war Canrenon (VII) der Hauptmetabolit in der organisch extrahierbaren Fraktion; VI war in erheblichen Mengen vorhanden, aber X und XI waren in extrem niedrigen Konzentrationen vorhanden.
N-Hydroxyamobarbital: der zweitwichtigste Metabolit von Amobarbital beim Menschen. Nach oraler Verabreichung von amobarbital mit 14C-Kennzeichnung an gesunde Probanden wurde der größte Teil der Radioaktivität im Urin und nur 4-5% im Stuhl über einen Zeitraum von 6 Tagen wiederhergestellt. Kein unverändertes Amobarbital wurde ausgeschieden. Zwei Hauptmetaboliten wurden gefunden und isoliert. Eines war 3'-Hydroxyamobarbital, das zuvor von Maynert identifiziert wurde. Das zweite könnte aufgrund seiner spektralen und chemischen Eigenschaften als N-Hydroxyamobarbital identifiziert werden.
Korrelation des 14C-Griseofulvin-Metabolismus bei Rattenlebermikrosomen, isolierten perfusierten Rattenlebern und bei Ratten mit Gallengangskannulen. Der Stoffwechsel von 14C-griseofulvin wurde bei Rattenlebermikrosomen, isolierten perfusierten Rattenlebern und Ratten mit Gallengangkanulen verglichen. In allen drei Präparaten waren 4-desmethylgriseofulvin und 6-desmethylgriseofulvin die Hauptmetaboliten. Das Verhältnis von insgesamt 4-desmethylgriseofulvin zu 6-desmethylgriseofulvin gebildet war 1,20, 0,89, und 1,01 in Leber-Mikrosomen, isolierte perfusierte Leber, und Ratten mit Gallengang-Cannulen, jeweils. Nach einer 7-minütigen Inkubation mit Lebermikrosomen blieb der Großteil (96%) des Griseofulvins unverändert. Nur kleine Mengen von 4-desmethylgriseofulvin (1.26%) der Dosis und 6-desmethylgriseofulvin (1.05% der Dosis) wurden gebildet. In der isolierten perfusierten Leber wurde der größte Teil des Arzneimittels (59 % der Dosis) innerhalb von 4 Stunden in die Galle ausgeschieden, hauptsächlich als 4-Desmethylgriseofulvin (24 % der Dosis) und 6-Methylgriseofulvin (24 % der Dosis). Bei Tieren mit Gallengangskannulen wurden 65% der Dosis innerhalb von 4 Stunden in die Galle und 18% in den Urin ausgeschieden. In der Galle wurden 32% der Dosis als 4-desmethylgriseofulvin und 20% der Dosis als 6-desmethylgriseofulvin ausgeschieden, während im Urin das Medikament überwiegend als 6-desmethylgriseofulvin (13% der Dosis) mit nur einer kleinen Menge von 4-desmethylgriseofulvin (1% der Dosis) während der ersten 4 h ausgeschieden wurde. Diese Ergebnisse zeigen, dass es eine gute Korrelation im metabolischen Schicksal von 14C-Griseofulvin in den Lebermikrosomen, isolierten perfusierten Leber und Ratten mit Gallengangskannulen gibt. Neben dem ähnlichen Verhältnis von 4-desmethylgriseofulvin zu 6-desmethylgriseofulvin gibt es auch eine Einigung im Umfang des Stoffwechsels und der biliaren Ausscheidung in der isolierten perfusierten Leber und bei Ratten mit Gallengangkanulen, was darauf hindeutet, dass die isolierte perfusierte Leber eine wichtige Technik für die Untersuchung des Medikamentenstoffwechsels bei Tieren ist.
Oxidative Biotransformation von 2-Acetylaminofluoren in Fötus- und Plazentagewebe von Menschen und Affen. Korrelationen mit der Aktivität der Arylhydrokarbonhydroxylase. Die gemischte oxidative Funktion von 14C-labeled 2-acetylaminofluorene (AAF) wurde in placental und fetal Gewebe von Menschen und Affen (Macaca nemestrina) in vitro untersucht. Der Hauptmetabolit, der in den meisten Geweben gebildet wurde, war 7-Hydroxy-AAF. Die Raten der Hydroxylationsreaktionen variierten stark zwischen den untersuchten Geweben und waren im Allgemeinen eine bis zwei Größenordnungen niedriger als diejenigen, die bei Rattenlebergewebe gemessen wurden. Hohe Korrelationen zwischen den Raten von 7-,5-, und 3- und zwischen 1- und N-Hydroxylationen von AAF wurden beobachtet. Die letzteren beiden Reaktionen reagierten weniger auf die Hemmung durch Kohlenmonoxid. Die Raten von 3-Hydroxylationen von Benzo[a]pyren (BP) waren ebenfalls stark korreliert mit den Raten von 7-, 5-, und 3-Hydroxylationen von AAF, aber waren nicht korreliert mit den Raten von 1- und N-Hydroxylationen in menschlichen Plazenta-Mikrosomen. Ein Mangel an statistisch signifikanten Korrelationen wurde unter den Raten vieler dieser Hydroxylationsreaktionen beobachtet, die in Primaten-Fötusgewebe untersucht wurden. Die Raten der 7-, 5-, und 3-Hydroxylationen von AAF waren in den meisten Fällen nicht statistisch korreliert mit den Raten der 3-Hydroxylation von BP in Homogenaten von Primaten-Fötusgewebe, aber statistisch signifikante Korrelationen zwischen den Raten der 3-Hydroxylation von BP und 1- und N-Hydroxylationen von AAF wurden in diesen Präparaten beobachtet. Die Ergebnisse schlugen zwei getrennte Mechanismen für die genetische Kontrolle der Raten der Plazenta-aromatischen Ring- und N-Hydroxylationsreaktionen vor, im Gegensatz zu scheinbar mehreren genetischen Kontrollen für die Raten dieser Hydroxylationsreaktionen in Primaten-Fötusgewebe.
Wirkung der 3-Methylcholanthren-Behandlung auf die Phenacetin-O-Dealkylierung in mehreren eingeborenen Mausstämmen. Ein Anstieg des Metabolismus von Phenacetin zu N-Acetyl-p-Aminophenol ist mit der Benzo[a]pyrene-Hydroxylase-Induktion durch 3-Methylcholanthren unter mehreren eingeborenen Mausstämmen korreliert. Während die Induktionsgröße der Phenacetin O-Dealkylierung wesentlich kleiner ist als die der Benzo[a]pyren-Hydroxylierung, deuten die Daten darauf hin, dass bei Mäusen der Stoffwechsel dieser beiden Substrate unter ähnlicher regulatorischer Kontrolle steht.
Weitere Studien über die Auswirkungen von Methyrapone auf die Hydroxylation von Anilid. Die verstärkende Wirkung von metyrapone auf die p-hydroxylation von acetanilide wurde mit der Verwendung einer neuen gaschromatographischen Methode zur Bestimmung von acetaminophen bestätigt. Es wurde gezeigt, dass diese Wirkung nicht auf die Hemmung der Hydrolyse von Acetaminophen oder die Störung seiner Bestimmung oder auf die bevorzugte Bildung anderer phenolischer Metaboliten zurückzuführen ist. Diese Wirkung von Methyrapone ist bemerkenswert Substrat-spezifisch: Phenolbildung aus den Homologen von Acetanilid, Formanilid und Propionanilid, und dass aus dem Sulfonamid-Analogon von Acetanilid, Methanesulfonanilid, wird durch Methyrapone über dem Konzentrationsbereich gehemmt, in dem die Acetanilid-Hydroxylation verstärkt wird. Die gleiche Substratspezifität wurde beobachtet, wenn der Modifikator Acetophenon war. Alpha, Alpha'-Dipyridyl verstärkt jedoch die Phenolbildung von allen drei Carbonacylaniliden, beeinflusst jedoch nicht die von Methansulfonanilid.
Art und Schicksal von Insektizidrückständen, die von Ratten in Zigarettenrauch eingeatmet werden. Radioaktives Carbaryl, Carbofuran, Parathion, Leptophos und DDT wurden Zigaretten hinzugefügt und der Mainstream-Rauch wurde über die Trachea in die Lungen von Ratten gerichtet. Die Gesamtübertragung von Radiocarbon in die Lunge reichte von 9 bis 15% von dem, was im Tabak während eines Rauchvorgangs verbrannt wurde, bei dem acht 5-ml-Puffs involviert waren. Die Ausatmung von 14C-Reststoffen während dieser Zeit betrug 24 bis 30% derjenigen, die mit allen Insektiziden mit Ausnahme von Carbofuran inhaliert wurden, von denen 42% der Reststoffe ausatmen. Nach 5 Stunden betrug die Gesamtausatmung des verbrauchten Radiocarbons 35% für Parathion, 65% für Carbofuran und etwa 50% für die anderen Produkte. Die Art der inhalierten 14C-Reststoffe, ihre Harn- und Fäkalausscheidung sowie ihre Ablagerung und Abgabe aus verschiedenen Organen und Geweben werden dargestellt.
Absorption und Disposition von 2-[4-(2,2-Dichlorocyclopropyl)phenoxy]-2-Methylpropanoinsäure, WIN 35,833, bei Ratten, Affen und Männern. 2-[4-(2,2-Dichlorocyclopropyl)phenoxy]-2-Methylpropanoinsäure, Win 35,833, wurde nach oraler Verabreichung leicht absorbiert; bei Ratten, Rhesus-Affen und menschlichen Freiwilligen wurden Höchstkonzentrationen des Arzneimittels im Plasma innerhalb von 2 Stunden nach der Medikation erreicht. Die zeitliche Konzentrationskurve des verabreichten Arzneimittels war bei Affen und Männern biphasisch, während bei Ratten die Kinetik eines einteiligen Modells beobachtet wurde. Verteilungsstudien des mit 14C gekennzeichneten Arzneimittels bei Ratten zeigten, dass der Großteil der Radioaktivität im Stuhl ausgeschieden wurde und dass signifikante Mengen von 14C durch Depotfett eingesperrt wurden. Affen und menschliche Subjekte beide eliminiert Win 35.833 hauptsächlich durch die Nieren. Das Medikament wurde sowohl als freie Säure als auch mit Glucuronsäure konjugiert, in Rattengallen und im menschlichen Urin ausgeschieden. Bei physiologischen Konzentrationen war Win 35,833 weitgehend an Ratten-, Affen- und menschliche Plasmaproteine gebunden. Eine gaschromatografische Methode zur Analyse des Arzneimittels im Plasma, im Urin oder in der Galle ergab eine lineare Beziehung zwischen Höchsthöhenverhältnissen und Konzentrationen im Bereich von 1-60 Schuppen / ml.
Biliäre Ausscheidung von Colchicin bei neugeborenen Ratten. Die 24-Stunden-LD50 von Colchicin bei neugeborenen Ratten beträgt 0,24 mg/kg, was ungefähr 1/10 der bei Erwachsenen beobachteten ist. Der 24-Stunden-LD50-Wert von Colchicin war bei Ratten über 25 Tage alt relativ konstant. In einem Versuch, den Mechanismus der erhöhten Empfindlichkeit der neugeborenen Ratten gegenüber der toxischen Wirkung von Colchicin zu bestimmen, wurde die Verteilung von 3H nach der Verabreichung von 3H-Cholchicin (0,1 mg/kg) bei Ratten im Alter von 10 und 35 Tagen gemessen. Die Konzentration von 3H war höher in allen Geweben des Neugeborenen als der Erwachsene nach IP-Verabreichung, was auf eine Unreife im Weg zur Elimination von Colchicin hindeutet. Nach der IV-Verabreichung verschwand die Radioaktivität viel langsamer aus dem Plasma des Neugeborenen Ratten als aus dem Erwachsenen. Dies war auf eine geringere Fähigkeit der Leber des Neugeborenen zurückzuführen, Colchicin zu konzentrieren und es in die Galle auszuscheiden. Die Entwicklung des ausscheidenden Mechanismus der Leber, der für die Ausscheidung von Colchicin verantwortlich ist, ereignete sich im gleichen Alter wie die Erhöhung des LD50. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass Colchicin bei Neugeborenen giftiger ist, weil das Medikament aufgrund der Unreife des Ausscheidungsprozesses der Leber länger im Körper verbleibt.
Die gastrointestinale Absorption von Methadon bei Ratten. Die Absorption von dl-Methadon aus dem Magen-Darm-Trakt der Sprague-Dawley-Ratte wurde durch die In-vivo-Segmenttechnik untersucht. Die Zwölffingerdarmabsorption, gemessen als Funktion von Zeit und Dosis, folgte der ersten Klasse Kinetik mit einer Halbwertszeit von 15,6 min. Die Absorption wurde nicht durch die vorherige oder gleichzeitige Verabreichung einer Vielzahl von Arzneimitteln beeinflusst. Die Absorption aus anderen Bereichen des Darms war ähnlich wie aus dem Zwölffingerdarm; Im Gegensatz dazu war die Absorption aus dem Magen deutlich langsamer. Die Magenabsorption wurde durch Alkalisierung des Mageninhaltes erhöht, war aber immer noch deutlich langsamer als aus dem Zwölffingerdarm. Die Magenentleerung von Methadon scheint der beschränkende Schritt in der gesamten gastrointestinalen Absorption des Arzneimittels zu sein, da die Entleerungsrate nach der Intubation des Arzneimittels in den Magen auch wesentlich langsamer war als die Geschwindigkeit der Zwölffingerdarmabsorption.
Disposition bei Ratten eines Polyoxypropylen-Polyoxyethylen-Copolymers, der bei der Plasmafraktionation verwendet wird. Ein Polyoxypropylen-Polyoxyethylen-Block-Copolymer von etwa 4750 Daltonen (Poloxamer 108, Pluronic F-38) in einem neuen Proteinfraktionierungsverfahren verwendet, kann in Patienten infundiert werden, die therapeutische Plasmafraktionen erhalten. Wir untersuchten die Disposition und die Pharmakokinetik von Poloxamer 108 bei Ratten als einen ersten Schritt zum Verständnis seines Verhaltens beim Menschen. Nach IV-Verabreichung bei Ratten wurden etwa 94% der 7 oder 100 mg/kg Dosen von Ethylen-14C-labelten Polymeren innerhalb von 3 Tagen im Urin ausgeschieden. Etwa 6% des Etiketts erschienen im Stuhl. Die Erythrozytenmembranen waren nicht durchlässig für das Polymer, und nur die Mutterverbindung konnte im Urin nachgewiesen werden. Zwanzig Stunden nach der Dosierung waren kleine Rückstände nur in der Niere, Leber, Dünndarm und Leiche nachweisbar. Die dritte Phase des Plasma-Verschwundungsmusters war nur bei der größeren Dosis sichtbar, aber die Plasma-Verschwundungskinetik war unabhängig von der Dosis im hier verwendeten Bereich. So wurde der größte Teil von Poloxamer 108 bei Ratten schnell durch renale Ausscheidung ausgeschieden, und ein kleinerer Teil wurde wahrscheinlich durch biliäre Ausscheidung entfernt. Diese Ergebnisse werden auf fortgesetzte Studien der Poloxamer 108 Disposition bei Menschen angewendet.
Aufnahme und Beseitigung von aldrin und dieldrin durch isolierte perfusierte Kaninchenlunge. Die Aufnahme, den Stoffwechsel und die Freisetzung von aldrin und dieldrin durch die Lunge wurden untersucht, indem isolierte perforierte Kaninchenlunge untersucht wurden, die künstlich belüftet und durch die Lungenarterie perforiert wurden. Sowohl recirkulierende als auch Single-Pass-Experimente wurden mit einem künstlichen Medium als Perfusat durchgeführt. Aldrin akkumulierte sich in der Lunge aus dem Perfusat durch zwei verschiedene Phasen der Aufnahme: eine schnelle Phase mit einfacher Diffusion und nicht-spezifischer Bindung und eine langsame Phase, die seinen Stoffwechselumsatz als Dieldrin darstellt. Dieldrin wurde nicht metabolisiert, sondern in der Lunge durch einen gesättigenden und ungesättigten Prozess angesammelt. Einpass-Experimente mit aldrin zeigten, dass die anfängliche Absorptionsgeschwindigkeit auf eine Komponente und eine Konstante angepasst werden könnte, die die Stoffwechselrate repräsentiert. Die Aufnahme von dieldrin war biphasisch: eine Phase unabhängig von der Perfusatkonzentration und die andere gesättigungsfähig in Bezug auf die Perfusatkonzentration. Durch Anwendung der Michaelis-Menten-Kinetik wurde die maximale Menge der dieldrin-Akkumulation, die der gesättigbaren Komponente zugeschrieben wird, auf 0,64 mumol/Lunge berechnet. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Anhäufung dieser chlorierten Xenobiotika durch einfache Diffusionsprozesse erfolgt, gefolgt von nichtspezifischer Gewebebindung. Es gab keine Hinweise auf irreversible Bindung von aldrin oder dieldrin, seinem Epoxid, in der Lunge. Während die Lunge eine Rolle bei der Metabolisierung von aldrin zu dieldrin spielt, gefolgt von einer vorübergehenden Speicherung, hat kein Substrat das Potenzial für die langfristige Speicherung in der Lunge.
Kinetische und spektrale Studien von Typ I- und Typ II-Verbindungen mit Rattenlebermikrosomen in Gegenwart des Hauptmetaboliten diphenylhydantoin. Die inhibitorische Wirkung des Hauptmetaboliten von diphenylhydantoin, 5-(p-hydroxyphenyl)-5-phenylhydantoin (HPPH), auf den In-vitro-Metabolismus von Ethylmorphin und Anilin durch Rattenlebermikrosomen wurde untersucht. Die N-Demethylierung von Ethylmorphin wurde durch HPPH wettbewerbsfähig gehemmt, während die Hemmung der Hydroxylierung von Anilin nicht wettbewerbsfähig war. Das von HPPH erzeugte Spektrum, wenn es zu mikrosomalen Suspensionen hinzugefügt wird, ähnelt nicht dem klassischen Typ I- oder Typ II-Spektrum, sondern einem umgekehrten Typ I-Spektrum. Spektrale Beweise zeigen, dass HPPH auch die Größe der spektralen Veränderung verringert, die von Typ I und Typ II-Verbindungen produziert wird.
Veränderung der Kinetik der Sulfacetamid-Gewebeverteilung bei Walker-Tumorträgern. Die Wirkung des Walker-Tumors auf die Sulfacetamidverteilung wurde bei Ratten 21 Tage nach der Tumorimplantation in das Hinterbein untersucht. Nach oraler Verabreichung von Sulfacetamid (5 und 20 min) wurde festgestellt, dass die Konzentration des Arzneimittels im Plasma und Leber von Tumorträgern im Vergleich zu der Kontrollgruppe niedriger war. 90 Minuten nach der Verabreichung von Sulfacetamid wurde jedoch festgestellt, dass die Konzentration des Arzneimittels in diesen gleichen Geweben bei Tumorträgern höher war als bei Kontrolltieren. Während der Tumor keinen offensichtlichen Einfluss auf die Sulfacetamidkonzentration im Gehirn hatte, waren die Medikamentenkonzentrationen im Fettgewebe von Tumorträdern immer höher als bei Kontrolltieren. Diese Veränderungen der Sulfacentamid-Präpositions-Kinetik könnten teilweise durch eine Verzögerung der gastrointestinalen Absorption des Arzneimittels erklärt werden. Im Gegensatz zu dem, was nach der oralen Verabreichung beobachtet wurde, wurden nach der IV-Injektion von Sulfacetamid stetig höhere Konzentrationen des Arzneimittels im Plasma von Tumorträdern gefunden. Darüber hinaus war die Halbwertszeit von Sulfacetamid bei diesen gleichen Tieren viel höher als bei Kontrolltieren. Es wird geschlossen, dass bei Walker-Tumorträdern Ratten Veränderungen in der Kinetik von Sulfacetamid auftreten, die Funktionen des Verabreichungsweges des Arzneimittels sind.
Messung von Zytochrom P-450 in Rattenleber homogeniert und Mikrosomen. Seine Verwendung zur Korrektur von mikrosomalen Verlusten durch Differenzzentrifugation. Cytochrom P-450 wurde in Rattenleberhomogenaten und Mikrosomen getestet, um mikrosomale Erholungen zu berechnen und für Verluste während der Ultrazentrifugation oder Sedimentation in Gegenwart von CaCl2 zu korrigieren. Die Werte für korrigiertes mikrosomales Protein bei unbehandelten Sprague-Dawley-Ratten waren zwischen 40 und 50 mg/g Leber. Die Analyse von Zytochrom P-450 in Leberhomogenat ist genau genug, um einen reproduzierbaren Erholungsfaktor zu berechnen. Der Wert der Methode liegt in ihrer Geschwindigkeit, ihrer Fähigkeit, Verluste in einem breiten Spektrum zu korrigieren und ihrer Fähigkeit, zuverlässige Werte der gesamten mikrosomalen Proteinmasse zu liefern. Zu den Grenzen dieser Methode gehören die Überbewertung des homogenierten Zytochroms P-450 und die Unfähigkeit zur Korrektur für nicht-mikrosomale Proteinkontamination. Überbewertung von Zytochrom P-450 kann korrigiert werden, indem der Absorptionsunterschied zwischen 450 und 510 nm mit dem Aussterbungskoeffizient von 100 mM-1cm-1 gemessen wird. Um genau zu sein, muss die Bestimmung von Zytochrom P-450 auf Mikrosomen bei Proteinkonzentrationen von etwa 3 mg/ml durchgeführt werden. Der in der Methode innewohnende Fehler kann konstant und minimal gehalten werden. Die Verwendung der Korrektur für mikrosomale Verluste wird empfohlen, um eine Einheitlichkeit zwischen den Ergebnissen verschiedener Laboratorien und eine angemessene Korrelation mit in vivo Studien der mikrosomalen Funktionen zu erzielen.
Identifizierung des "großen" menschlichen Plazenta-Laktogens in der Plazenta und im Serum. Aufgrund der zunehmenden Beweise für die Heterogenität von Polypeptidhormonen wurden Studien der molekularen Spezies des menschlichen Plazenta-Laktogens (hPL) initiiert. Als Extrakte von frisch gelieferten menschlichen Placentas über Sephadex G-100 in 0,05M Ammoniumkarbonat weitergegeben wurden, wurden drei immunreaktive Spitzen nachgewiesen. Zusätzlich zu einem Peak, der dem nativen hPL (Kav = 0,39) entspricht, und einem im leeren Volumen, war ein konsistenter Peak vorhanden, der vor hPL (Kav = 0,20) ausgelöst wurde. Letztere repräsentierten 2-25% der gesamten hormonellen Aktivität und konnten ohne signifikante Umwandlung in hPL wieder aufgenommen werden. In 8M Urea verhielt sich der Höhepunkt weiterhin als große molekulare Gewichtsform sowohl auf der Sephadex-Chromatographie als auch auf der Polyacrylamid-Disk-Gel-Elektrophorese. Extraktionsverfahren bei neutralem und alkalischem pH erzeugten ähnliche Mengen des größeren Materials. [125I]iodo-hPL wurde durch die Bedingungen der Extraktion oder Analyse nicht in die größere Form umgewandelt. Diese Eigenschaften entsprechen einem größeren Molekulargewicht, einer nicht aggregierten Form von hPL. Im Vergleich zum nativen Hormon waren die Idsplacement-Kurven für die größere Form in Radioimmunoassay-Studien parallel. Sera, die während der verschiedenen Schwangerschaftsstadien von schwangeren Frauen erhalten wurden, zeigten auch konsistente Beweise für eine große molekulargewichtige Form des Hormons. Diese Beobachtungen liefern direkte Beweise, sowohl im Plazentagewebe als auch im Serum für "große" hPL.
Die Wasser-zu-Luft-Übertragung von 35SO4 = durch Blasenbruch. Die Übertragung von 35SO4= von Wasser in die Luft durch Blasenbruch wurde als Funktion von drei Ebenen jeder der drei Variablen in einer Blasenlösung untersucht. Die Variablen waren pH, Oberflächenwirkstoffkonzentration und Na2 35SO4-Konzentration. Eine Kombination der oben genannten Variablen wurde auch bei drei verschiedenen Temperaturen untersucht. Sterile Wasserlösungen, die unterschiedliche Kombinationen der oben genannten Faktoren und eine feste Menge von 22NaCl enthielten, wurden für 1 Stunde in einem Gehäuse geblasen. Nach dem Blasen wurden Proben des Aerosols produziert, die größeren Tropfen, die aus der Luft fielen, und die bulk-Lösung wurden gesammelt und für ihren 35S- und 22Na-Gehalt unter Verwendung von flüssiger Scinzillation getestet. Die 35S/22Na-Anreicherung für jede Tropfenprobe im Vergleich zum Verhältnis für die bulk-Lösung wurde bestimmt, und es wurde festgestellt, dass es von der Kombination der Faktorenwerte abhängig war, die geblasen wurden. Sowohl positive als auch negative Anreicherungen wurden gefunden, wobei große positive Anreicherungen konsequent nur für den höchsten Wert der Oberflächenwirkstoffkonzentration gefunden wurden. Die Temperaturstudie zeigte keine signifikanten Anreicherungsunterschiede für eine der drei untersuchten Temperaturen.
Differentiale Wirkungen von Phenobarbital und Pentobarbital auf isoliertes Nervengewebe. Epileptiform nach Entladungen, die durch wiederholte elektrische Stimulation chronisch isolierter Kortikalplatten (Katze) hervorgerufen wurden, wurden durch niedrige Dosen von Phenobarbital verkürzt, aber nicht durch hypnotische Dosen von Pentobarbital beeinflusst. Sowohl Pentobarbital als auch Phenobarbital erhöhten die Schwelle und senkten die Spike-Amplitude in isolierten Ischiasnerven. Die Wirkung beider Medikamente wurde erhöht, indem Na im Medium reduziert und der pH-Wert des Ringer verringert wurde. Ähnlich wie die Wirkung anderer allgemeiner Anästhetika wurde die axonale Wirkung von Pentobarbital durch D2O-Ersatz für H2O in Ringer verstärkt (was darauf hindeutet, dass Gewebewasser an der Pentobarbitalwirkung beteiligt ist), während die D2O-Ersatzwirkung die Wirkung von Phenobarbital oder lokalen Anästhetika nicht modifizierte. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die unterschiedlichen In-vivo-Effekte von Pentobarbital und Phenobarbital möglicherweise auf einen Unterschied in ihrer Wirkung auf aufregende Membranen zurückzuführen sind (anstatt auf eine unterschiedliche regionale Verteilung im Gehirn).
Die Reaktion der Pferde-Leber-Alkoholdehydrogenase mit Glioxal. Pferdeheberalkoholdehydrogenase wurde mit Glioxal bei verschiedenen pH-Werten von 6,0 bis 9,0 reagiert. Bei pH 9.0 durchläuft das Enzym in den ersten Minuten der Reaktion eine schnelle Aktivierung, gefolgt von einem Rückgang der Aktivität, der 10% der Aktivität des einheimischen Enzyms erreicht. Die chemische Analyse des inaktivierten Enzyms nach der Reduktion von Natriumborohydrid zeigt, dass 11 Argi-ine und 11 Lysinrückstände pro Mole modifiziert werden. Bei einem pH-Wert von 7,7 nimmt die Enzymaktivität während der ersten Stunde der Reaktion mit Glioxal zu und nimmt dann langsam ab. Die chemische Analyse zeigt, dass 4 Arginin- und 3 Lysinrückstände pro Mole beim Maximum der Aktivierung im Enzym modifiziert werden. Bei einem pH-Wert von 7,0 wird das Enzym viermal aktiviert. Die chemische Analyse zeigt, dass in diesem aktivierten Enzym 3 Lysin und keine Argininrückstände pro Mole modifiziert wurden. Steady-state kinetische Analyse deutet darauf hin, dass das aktivierte Enzym nicht Substrathemmung ausgesetzt ist und dass seine Michaelis-Konstante für Ethanol dreimal größer ist als die des einheimischen Enzyms. Die mögliche Rolle von Arginin- und Lysinrückständen in der katalytischen Funktion der Leberalkoholdehydrogenase wird diskutiert.
Die konformationale Schwingung der Delta-Chimotrypsin-Beteiligung von Methionin-192. Bei Delta-Chimotrypsin ist die Reaktivität von Methionin-192 gegenüber P-Nitrophenacylbromid stark reduziert, wenn die Alpha-Aminogruppe von Isoleucin-16 acetyliert wurde. Da die Acetylierung von Isoleucin-16 Delta-Chimotrypsin zu einer Konformation bringt, ähnlich wie seine alkalische, deutet dies darauf hin, dass Methionin-192 eine beeinträchtigte Reaktivität in der alkalischen Konformation des Proteins aufweisen sollte. Es wird tatsächlich beobachtet, dass seine chemische Reaktivität als Funktion des pH vom Ionisierungszustand der alpha-amino-Gruppe von Isoleucin-16 (pKapp 9 bei 15 Grad C) wie auch von der Struktur des Enzyms abhängt. Nach der chemischen Reaktion von Methionin-192 mit Wasserstoffperoxid zeigt Isoleucin-16 eine langsame Reaktionsrate mit Fluoresamin als wenn Methionin-192 frei ist. Als Ergebnis der Methionin-192-Oxidation verschiebt sich der scheinbare pK des alkalischen Übergangs von 9 auf etwa 11 bei 15 Grad C. Dies spiegelt sich in dem Verschwinden der zuvor beobachteten Lagphase für die anfängliche Aktivität des Enzyms wider, wenn es bei alkalischem pH inkubiert wird [Eur. J. Biochem. (1973) 39,293 bis 300. Das Fehlen einer chemischen Reaktivität von Methionin-192 im alkalischen Zustand des Enzyms wird durch das Auftreten einer Lagphase in der Reaktion des Proteins mit Iodacetat nach einer Inkubation bei alkalischem pH bestätigt. Eine solche Lagphase tritt nicht auf, wenn diese Inkubation bei neutralem pH durchgeführt wird. Da diese Verzögerungsphase ähnlich derjenigen ist, die sich in der Aktivität während der Isomerisierung des Enzyms von seinem alkalischen zu seinem neutralen Zustand manifestiert, werden die gegenwärtigen Daten so interpretiert, dass sie eine koordinierte Bewegung von Isoleucin-16 und Methionin-192 während dieses Isomerisierungsprozesses implizieren. Sie deuten auch darauf hin, dass sich das Enzym Methionin-192 in alkalischer Form in das Innere des Proteins zurückgezogen hat. Da die spektroskopischen Eigenschaften des Zymogens und der hohen pH-Form des Enzyms ähnlich sind, deuten sie darauf hin, dass Methionin-192 in der alkalischen Konformation des Enzyms eine ähnliche Position einnimmt wie in dem Zymogenen.
Untersuchungen zum kinetischen Mechanismus der Octopine-Dehydrogenase. Die Steady-State Kinetik Der kinetische Wirkmechanismus der Octopine dehydrogenase wurde untersucht. Dieses Enzym katalysiert die reversible Dehydrogenierung von D-Oktopin zu L-Arginin und Pyruvat, in Gegenwart von Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid. Initiale Geschwindigkeits- und Produkthemmungsstudien wurden in beiden Richtungen durchgeführt. Die meisten Ergebnisse stimmen mit einem bi-ter-Sequenzmechanismus überein, bei dem NAD+ zuerst an das Enzym bindet, gefolgt von D-Oktopin, und die Produkte in der Reihenfolge L-Arginin, Pyruvat und NADH freigesetzt werden. Verschiedene kinetische Parameter wurden für jeden Reaktant bei 33 Grad C, bei pH 9,6 für NAD-Reduktion, bei pH 6,6 für NADH-Oxidation bestimmt.
Der katalytische Mechanismus der Carbonanhydrase. Wasserstoff-Isotop-Effekte auf die kinetischen Parameter des menschlichen C-Isoenzyms. Die Steady-State-Kinetik der Wechselkonvertierung von CO2 und HCO3 katalysiert durch menschliche Kohlenstoffanhydrase C wurde unter Verwendung von 1H2O und 2H2O als Lösungsmittel untersucht. Die pH-unabhängigen Teile der Parameter k(cat) und Km sind 3-4 mal größer in 1H2O als in 2H2O für beide Richtungen der Reaktion, während die Verhältnisse k(cat)/Km viel kleinere Isotopwirkungen zeigen. Bei CO2 oder HCO3 als Substrat wird die hauptsächliche pH-Abhängigkeit in k(cat) beobachtet, während Km unabhängig vom pH erscheint. Der pKa-Wert, der die pH-Rate-Profile charakterisiert, ist bei 2H2O etwa 0,5 Einheiten größer als bei 1H2O. Die Hydrolyse von p-Nitrophenylacetat, katalysiert durch menschliche Carbonanhydrase C, ist bei 2H2O etwa 35% schneller als bei 1H2O. Bei beiden Lösungsmitteln sind die pKa-Werte der pH-Rate-Profile ähnlich denen, die bei der CO2-HCO3-Interkonvertierung beobachtet wurden. Es wird vorläufig vorgeschlagen, dass der Rate-limiting-Schritt bei Sättigungskonzentrationen von CO2 oder HCO3 eine intramolekulare Protonübertragung zwischen zwei ionisierenden Gruppen in der aktiven Stelle ist. Es kann nicht entschieden werden, ob die Transformation zwischen enzymbundenem CO2 und HCO3 eine Protontrnasphäre beinhaltet oder nicht.
Reinigung und Eigenschaften von Cinnamylalkoholdehydrogenase-Isoenzymen aus Soja-Zell-Suspensionskulturen. Zwei Isoenzyme einer NADP+-abhängigen Cinnamylalkoholdehydrogenase und einer NAD+-abhängigen aliphatischen Alkoholdehydrogenase wurden aus Zellensuspensionskulturen von Sojabohnen (Glycine max L., var. Mandarin) die während des Wachstums Lignin bilden. Diese Enzyme könnten durch Chromatographie auf DEAE-Cellulose und Hydroxyapatit voneinander getrennt werden. Die Cinnamylalkoholdehydrogenase-Isoenzyme wurden teilweise durch (NH4)2SO4-Fraktionierung und Spaltenchromatographie auf DEAE-Cellulose, Sephadex G-100 und Hydroxyapatit gereinigt. Das Molekulargewicht der Enzyme wurde anhand der Elusionsvolumina aus einer Sephadex G-100-Spalte geschätzt und erreichte etwa 43.000 (Isoenzym 1) und 69.000 (Isoenzym 2). Höchste Reaktionsraten wurden bei der Oxidation von Coniferylalkohol bei pH 9,2 (Isoenzym 1) und pH 8,8 (Isoenzym 2) beobachtet; bei der umgekehrten Reaktion war der pH 6,5 für das Isoenzym 2 optimal. Während Isoenzym 1 für Coniferylalkohol spezifisch ist, kann Isoenzym 2 auch Cinnamylalkohol und eine Reihe von ersetzten Cinnamylalkoholen oxidieren, sind Km-Werte für ersetzte Cinnamaldehyden 3-11 mal niedriger als für die entsprechenden Alkohole. Kein Isoenzym reagierte mit Benzylalkohol, Anisalkohol oder Ethanol. Substrathemmung für die vorwärts und umgekehrte Reaktion wurde bei Isoenzym 2 gefunden, aber nicht bei Isoenzym 1. Die Gleichgewichtskonstante wurde als etwa 10(9) zugunsten der Koniferaldehydreduktion bestimmt. Die mögliche Rolle der Cinnamylalkoholdehydrogenase bei der Lignin-Biosynthese wird diskutiert.
Der Pyruvate-Dehydrogenase-Komplex von Azotobacter vinelandii. Regulierung der Tätigkeit. Das Vorhandensein von Aktivatoren (AMP und Sulfat) oder Inhibitoren (Acetyl-CoA) hat keinen Einfluss auf den Hill-Koeffizient des S-förmigen [Pyruvat] – Geschwindigkeitskurve entweder der pyruvate-NAD+ Gesamtreaktion (h gleich 2,5) oder der der pyruvate-K3Fe(CN)6 AKTIVITÄT DES ERSTEN ENZYMES (H EQUAL 1.3). pH-Studien zeigten, dass der Hill-Koeffizient von der Sub-Einheit-Ionisierung innerhalb des Pyruvat-haltigen Komplexes abhängt und nicht von denen im freien Komplex. Es kommt zu dem Schluss, dass die Pyruvat-Konvertierung und nicht die Pyruvat-Bindung für das allosterische Muster verantwortlich ist. Die Aktivität ist auf das Fehlen einer Proteinkinase zurückzuführen, die hauptsächlich bei den Acetyl-CoA/CoA- und NADH/NAD+-Spiegeln und durch den Wert der Energiebelastung reguliert wird.
Arginine Decarboxylase aus den Sämlingen von Lathyrus sativus. Reinigung und Eigenschaften. Die Arginin-Dekarboxylase, die nach 24 Stunden Keimung in den Sämlingen von Lathyrus sativus erscheint, erreicht ihren Höchststand um 5-7 Tage, wobei die Cotyledone etwa 60% der Gesamtaktivität in den Sämlingen am 5. Tag enthalten. Das Zytosol-Enzym wurde 977-mal von ganzen Sämlingen durch Schritte gereinigt, die Manganchloridbehandlung, Ammoniumsulfat- und Acetonfraktionationen, positive Adsorption auf Alumina C-Gamma-Gel, DEAE-Sephadex-Chromatographie und anschließende Vorbereitungs-Disk-Gel-Elektrophorese beinhalten. Das Enzym wurde nach elektrophoretischen und immunologischen Kriterien homogen, hatte ein Molekulargewicht von 220.000 und scheint ein Hexamer mit identischen Untereinheiten zu sein. Der optimale pH-Wert und die optimale Temperatur für die Enzymaktivität betrugen 8,5 und 45 Grad Celsius. Das Enzym folgt der typischen Michaelis-Menten-Kinetik mit einem Km-Wert von 1,73 mM für Arginin. Obwohl Mn2+ bei niedrigeren Konzentrationen die Enzymaktivität stimulierte, gab es für die Aktivität keine Abhängigkeit des Enzyms von irgendeinem Metall. Die Arginin-Dekarboxylase von L. sativus ist ein Sulfhydryl-Enzym. Die Daten über Co-Faktor-Anforderung, Hemmung durch Carbonyl-Reagenzien, Reduktionsmittel und Pyridoxalphosphat-Inhibitoren und eine teilweise Umkehrung durch Pyridoxalphosphat der Hemmung durch Pyridoxal-HCl deuten darauf hin, dass Pyridoxal 5'-Phosphat als Co-Faktor für das Enzym beteiligt ist. Die Enzymaktivität wurde durch verschiedene Aminen, einschließlich des Produkts Agmatin, wettbewerbsfähig gehemmt. Die höchste Hemmung wurde mit Sperma und Arkain erzielt. Der Substratanalog, L-Canavanin, homologe L-Homoarginin und andere grundlegende Aminosäuren wie L-Lysin und L-Ornithin hemmten die Enzymaktivität wettbewerbsfähig, wobei Homogarginin in dieser Hinsicht am wirksamsten ist.
Hexokinase A. Succinylation und Eigenschaften der aktiven Untereinheit. Hexokinase A (ATP: D-Hexose 6-Phosphotransferase, EC2.7.1.1) dissociiert in seine Untereinheiten bei Reaktion mit succinic Anhydrid. Die chemisch modifizierten Subeinheiten könnten in einer katalytisch aktiven Form isoliert werden. Die Km-Werte für ATP und Glukose waren in der gleichen Reihenfolge wie die für das native Enzym. Von den 37 vorhandenen Aminogruppen pro Enzym-Untereinheit befinden sich 2-3 dieser Gruppen möglicherweise in der Nähe des Interaktionsgebiets der Untereinheit. Der Verlust von 50 % der anfänglichen Aktivität, der der Succinylation dieser reaktiveren Aminogruppen folgt, scheint nicht auf die Modifikation eines Rückstands an der enzymaktiven Stelle oder auf eine Veränderung der tertiären Struktur des Proteins zurückzuführen. Dieser 50%ige Verlust der Enzymaktivität kann mit der Dissoziation des Dimers in Monomere zusammenhängen. Sowohl das native Enzym als auch die succinylierten Subeinheiten haben die gleichen H-abhängigen Denaturationsrate-Profile als Reaktion auf 2 M Urea. Darüber hinaus scheint der scheinbare pK der Gruppe, die an dem Übergang von einer stabileren Konformation des Proteins im Säurebereich zu einer weniger stabilen bei alkalischem pH beteiligt ist, dem pK der Gruppe ähnlich zu sein, die an dem Übergang zwischen der protonierten inaktiven Form des Enzyms und einer aktiven deprotonierten Form beteiligt ist. Die succinylierte Subeinheit zeigt eine "negative Kooperativität" in Bezug auf ATP bei leicht sauren pH-Werten; jedoch wurden bei der normalen experimentellen Bedingungen mit der succinylierten Subeinheit die langsamen Übergänge der Reaktionsprogressionskurve und der durch physiologische Polyanionen induzierte Aktivierungseffekt, die für das native Enzym beobachtet wurden, nicht nachgewiesen.
Die Renaturation von reduziertem Polyalanyl-Cymotrypsinogen und Chymotrypsinogen. Chymotrypsinogen wurde erfolgreich in der Lösung nach der Reduktion seiner 5 Disulfidbindungen in 6 M guanidin-HCl wiederhergestellt. Dies wurde durch die Untersuchung der Renaturation eines Modellderivates, Polyalanyl-Chimotrypsinogen, möglich gemacht. Es wurde gezeigt, dass das reduzierte Derivat spontan mit einem Ertrag von 30-40% in Moleküle, die monomerisch sind und vollständig anfällig für die Aktivierung durch Trypsin, reoxodisiert und reoxodisiert. Chymotrypsinogen kann auch neu gebildet werden, aber nur in Gegenwart von Reagenzien, die den Disulfid-Interchange ermöglichen, und von mäßigen Konzentrationen von Guanidin-HCl oder Harnstoff. Diese Ergebnisse veranschaulichen, wie die kinetische Verhaftung von falsch gefalteten Molekülen durch falsche S-S-Bindungen und Aggregation überwunden werden kann, wodurch die korrekte Nachbearbeitung des Proteins ermöglicht wird.
Weitere Studien zur Bildung von Lipidperoxid in isolierten Hepatozyten. Die Bildung von Lipidperoxid wurde initiiert, indem entweder ADP-komplexe Fe3+ oder Cumenhydroperoxid zu einer Suspension isolierter Hepatozyten hinzugefügt wurden. Die Reaktion wurde durch Malonaldehydmessungen überwacht. Bei der Zugabe von Eisen begann die Produktion von Malonaldehyd in den Zellen sofort, hörte jedoch innerhalb von 30-60 Minuten auf, und die Reaktion war dosierbar mit Eisenkonzentrationen von 19 bis 187 muM. Die Bildung von Malonaldehyd wurde mit erhöhter Sauerstoffaufnahme und konjugierter Dieneproduktion in Verbindung gebracht. Die In-vitro-Zusetzung von N, N, N', N'-Tetramethyl-p-phenylenediamin, Menadion oder p-benzoquinone hemmte die Eiseninduzierte Malonaldehydproduktion. Es war auch möglich, ein scheinbares Verschwinden von Malonaldehyd aus frischen Zellen durch Zugabe ausreichender Mengen von N,N,N',N'-Tetramethyl-p-Phenylenediamin (100 mM) zu demonstrieren. Die Abschwächung der Eisen-induzierten Malonaldehyd-Produktion wurde mit einer erhöhten Bindung von Eisen an eine intrazelluläre Ferritin-Fraktion korreliert. Darüber hinaus war die Bildung von Malonaldehyd auch mit einer Umwandlung von reduziertem Glutathion in die oxidierte Form verbunden, was wiederum eine schnellere Durchdringung aus den Zellen in das umgebende Medium des oxidierten als des reduzierten Thiols zeigte. So gab es zusammen mit den Redox-Änderungen auch einen Gesamtverlust von Glutathion aus den Zellen. Die von Cumene-Hydroperoxid-induzierte Produktion von Malonaldehyd könnte durch Hinzufügen dieses Peroxids in Konzentrationen von 150 muM zur Leberzellinkubation initiiert werden. Bei Konzentrationen unter 150 muM war eine Lagphase vorhanden, die glutathionabhängig schien. Es kommt zu dem Schluss, dass Eisen in die Zelle gelangt, dann wird es wahrscheinlich innerhalb der Zelle durch NADPH über die NADPH-Zytochrom P-450 Reduktase reduziert und in dem reduzierten Zustand beginnt Lipidperoxidation. Die Reaktion wird durch intrazelluläre Mechanismen gehemmt, wobei das Glutathion-Redox-System von primärer Bedeutung ist und möglicherweise durch die Bildung des Eisen-Apoferritin-Komplexes beendet wird.
Über den Mechanismus der Ketogenese und ihre Kontrolle. Reinigung, kinetischer Mechanismus und Regulierung verschiedener Formen von mitochondrialen Acetoacetyl-CoA-Thiolasen aus Ziegenleber. Zwei mitochondriale Formen von Acetoacetyl-CoA-Thiolasen, die als Enzym A und Enzym B bezeichnet wurden, wurden aus Ziegenleber kristallisiert. Sie könnten durch Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese homogen sein. In Richtung des Acetoacetyl-CoA-Splitze-Enzyms A zeigt eine doppelte wettbewerbsfähige Substrathemmung, wenn Acetoacetyl-CoA bei verschiedenen festen CoA-Konzentrationen variiert wird. Bei Enzym B wird ein paralleles kinetisches Muster erhalten, wenn Acetoacetyl-CoA bei verschiedenen festen CoA-Konzentrationen variiert wird. In der Richtung der Acetoacetyl-CoA-Synthese zeigen beide Enzyme lineare gegenseitige Plots der Anfangsgeschwindigkeiten gegenüber Acetyl-CoA-Konzentrationen in Abwesenheit von CoA. Diese Anfangsgeschwindigkeitskinetiken in der vorwärts- und in der umgekehrten Richtung entsprechen einem Ping-Pong-Reaktionsmechanismus für beide Enzyme, die ein Acetyl-S-Enzym als Zwischenmittel einbeziehen. Bei gesättigenden Substratkonzentrationen beträgt das Verhältnis von Acetoacetyl-CoA-Synthese / Aceto-Acetyl-CoA-Splitter 0,31 für Enzym A und 0,08 für Enzym B. Die maximale Geschwindigkeit in Richtung der Acetoacetyl-CoA-Synthese der Enzyme A und B beträgt 0,43 mumol X min-1 X-Einheit Thiolase-1 und 0,10 mumol X min-1 X-Einheit Thiolase-1, jeweils. Beide Enzyme zeigen fast die gleiche Affinität für Acetyl-CoA. Die Km-Werte sind 91 muM (Enzym A) und 80 muM (Enzym B). Coenzym A und Acetoacetyl-CoA wirken beide als Inhibitoren in Richtung der Acetoacetyl-CoA-Synthese: Coenzym A ist ein nichtlinearer wettbewerbsfähiger Inhibitor beider Enzyme. Acetoacetyl-CoA übt eine negative Kooperativität auf Enzym A aus (nH = 0,63) und ist ein wettbewerbsfähiger Inhibitor für Enzym B (Ki = 1,6 muM). Die katalytischen und regulatorischen Eigenschaften der Acetoacetyl-CoA-Thiolasen A und B werden in Bezug auf ihre vorgeschlagene Rolle bei der Regulierung der Ketogenese diskutiert. Intracelluläre Schwankungen der Acetoacetyl-CoA/3-Hydroxybutyryl-CoA-Verhältnisse, die zu einer Suspension der Hemmung beider Enzyme bei hohen NADH/NAD-Verhältnissen führen, werden als Kontrollmechanismus der Ketogenese zusätzlich zu den bereits bekannten Mechanismen postuliert.
D-Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (Entner-Doudoroff Enzym) von Pseudomonas fluorescens. Reinigung, Eigenschaften und Regelung. 1. Das Vorhandensein von zwei verschiedenen D-Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenasen in Pseudomonas fluorescens wurde nachgewiesen. Basierend auf ihrer unterschiedlichen Spezifität und ihrer unterschiedlichen Stoffwechselregulierung wird ein Enzym zum Entner-Doudoroff-Pfad und das andere zum Hexose-Monophosphat-Pfad zugewiesen. Es wird ein Verfahren zur Isolierung der D-Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase beschrieben, die Teil des Entner-Doudoroff-Pathways (Entner-Doudoroff-Enzym) bildet. Eine 950-fache Reinigung wurde mit einem Gesamtertrag von 44% erreicht. Die endgültige Zubereitung, die eine spezifische Aktivität von etwa 300 mumol NADH pro min pro mg Protein hat, erwies sich als homogen. Das Molekulargewicht des Enzyms Entner-Doudoroff wurde durch Gelpermeationschromatographie auf 220000 festgestellt, und das des anderen Enzyms (Zwischenferment) wurde auf 265000 gezeigt. Der pI des Enzyms Entner-Doudoroff hat sich als 5,24 und der des Zwischenferments als 4,27 erwiesen. Das Enzym Entner-Doudoroff ist stabil im Bereich von pH 6 bis 10,5 und zeigt seine maximale Aktivität bei pH 8,9. Das Entner-Doudoroff-Enzym zeigte Spezifität sowohl für NAD+ als auch für NADP+ und zeigte homotrope Wirkungen für D-Glucose 6-Phosphat. Es wird durch ATP gehemmt, der als negativer allosterischer Effektor wirkt. Andere Nukleosid-Triphosphaten sowie ADP sind ebenfalls hemmend. Das Enzym katalysiert die Übertragung des axialen Wasserstoffs am Kohlenstoff-1 von Beta-D-Glukopyranose 6-Phosphat auf die Si-Fraktion von Kohlenstoff-4 des Nikotinamid-Rings und muss als B-Seite stereospezifische Dehydrogenase eingestuft werden.
Reinigung und Eigenschaften von Kartoffel 1,4-alpha-D-Glucan: 1,4-alpha-D-Glucan 6-alpha-(1,4-alpha-Glucano)-Transferase Beweis gegen eine doppelte katalytische Funktion im Amylose-Branching-Enzym. Q-Enzym, das Enzym, das die 1,6-alpha-glucosidischen Zweigbindungen von Amylopectin synthetisiert, wurde von Kartoffeln zu nahezu Homogenität gereinigt. Das Molekulargewicht des Enzyms beträgt 85.000. Das aktive Enzym ist ein Monomer, mit einer molaren Aktivität bei pH 7.0 und 24 Grad C von 15. Die Aktivierungsenergie beträgt 25 kJ/mol unter 15 °C und ändert sich stark auf 63 kJ/mol über dieser Temperatur. Die Enzymaktivität wird nicht durch Mg2+ oder ATP beeinflusst. Es gibt etwa 11 leicht titrierbare Sulfhydrylgruppen pro Molekül. Der Beweis, dass das Enzym eine einzelne Proteinentität ist, ohne hydrolytische Aktivität gegenüber Amylose, widerspricht einem früheren Bericht, dass das Q-Enzym aus zwei Komponenten besteht, einer Hydrolase mit Molekulargewicht 70000, und einer Transferase mit Molekulargewicht 20000. Das Q-Enzym wirkt auf natürliche und synthetische Amylosen, um Produkte zu liefern, die Amylopektin in Bezug auf die durchschnittliche Einheitskette Länge, Abbau von Beta-Amylolyse und Jod Fleck ähneln. Die Profile der Einheitsketten dieser synthetischen Produkte unterscheiden sich jedoch von denen des nativen Amylopektins. Zusätzliche Zweigbindungen werden durch Q-Enzym in Kartoffelamylopektin eingeführt, aber das Produkt hat keine Ähnlichkeit mit Phytoglycogen.
Faktoren, die die molekulare Struktur und die Agglutinationsfähigkeit von Concanavalin A und anderen Lektinen beeinflussen. Ultracentrifugationsanalysen wurden auf Lektinen unter unterschiedlichen Bedingungen von pH, Ionenstärke und Temperatur durchgeführt. Es wurde gezeigt, dass das Phytohemagglutinin von Phaseolus vulgaris, das Weizen-Agglutinin und das Soja-Agglutinin stabil sind, wenn diese Parameter variiert sind, während das Concanavalin A-Molekül einen auffälligen reversiblen Dimer-Tetramer-Übergang mit pH-Variationen (von 6,0 bis 7,2) und Temperatur (von 4 Grad bis 37 Grad C) zeigt. Es wurde auch gezeigt, dass sich in Agglutinationsexperimenten, die bei verschiedenen Temperaturen durchgeführt wurden, Zellen schließlich mit den ersten drei Lektinen aggregieren, vorausgesetzt, dass die Inkubationszeit ausreicht, während die Konkanavalin-A-induzierte Agglutination zuvor temperaturempfindlich war. Diese Ergebnisse deuten stark darauf hin, dass die Wirkung der Temperatur auf die Agglutination durch Lektine im Wesentlichen auf einen strukturellen Übergang des Lektins selbst und nicht nur auf die Modifikation der Eigenschaften der Zelloberfläche zurückzuführen sein kann.
Chemische Zusammensetzung von Axoplasma in Myxicola und Löslichkeitseigenschaften seiner strukturellen Proteine. Die chemische Zusammensetzung des aus dem riesigen Axon von Myxicola infundibulum gewonnenen Axoplasmas wurde analysiert, und einige der Faktoren, die seine Gelstruktur dispergieren, wurden identifiziert. Das Axoplasma enthält etwa 3-6% Protein und 0-12% Lipid. Es ist isosmotisch mit Meerwasser und hat einen pH-Wert bei 7-0. Zu den anorganischen Ionen im extrahierten Axoplasma gehören: Na+, 13m-Mole/kg nass wtl; K+, 280; Cl-, 24; Ca2+, 0-3; Mg2+, 3. Zu den freien organischen Ionen im Axoplasma gehören: gly, 180 m-mole/kg feuchte St.; Zysteinsäure, 120; asp, 75; glu, 10; ala, 7; tau, 5; thr, 2; gln und ser, Spur; homarin, 63; isethionate, 0.5. Die Gelstruktur wird durch Lösungen, die 1--10 mM-Ca2+ enthalten, dispergiert, da dieses Ion eine endogene Protease aktiviert. Das Gel kann auch ohne Proteinalyse durch Lösungen, die 0-5 M-KCl, oder 0-5 M Guanidin-Hydrochlorid oder 3-5 M Urea enthalten, die alle neurofilamenten abbauen, dispergiert werden. Es wird argumentiert, dass viele Aspekte der Zusammensetzung und Dispersionseigenschaften von Myxicola-Axoplasma denen in anderen Axonen ähnlich sind.
Der Stoffwechsel von Cyclohexanol durch Acinetobacter NCIB 9871 Acinetobacter NCIB 9871 wurde durch selektive Kultur auf Cyclohexanol isoliert und wächst mit dieser Verbindung als einzige Quelle von Kohlenstoff. Es zeigt ein eingeschränktes Wachstumspektrum, da es nicht in der Lage ist, auf einer breiten Palette alternativer alzyklischer Alkohole und Ketone zu wachsen. Cyclohexanol-gewachsene Zellen oxidieren das Wachstumssubstrat mit einer Rate von 230 mul von O2/h pro mg trockener Wt mit dem Verbrauch von 5,65 mumol von O2/mumol-Substrat. Cyclohexanon oxidiert mit einer ähnlichen Rate mit dem Verzehr von 4,85 mumol von O2/mumol. 1-Oxa-2-Oxocycloheptan und 6-Hydroxyhexanoat werden beide mit der gleichen langsamen Rate von 44 Mul von O2/h pro mg trockener Wt oxidiert und Adipat wird nicht oxidiert. Studien mit Zellextrakten zeigen das Vorhandensein von induzierbaren Dehydrogenasen für Cyclohexanol, 6-Hydroxyhexanoat und 6-Oxohexanoat und einer Monoxygenase, die in Verbindung mit einer Laktonase Cyclohexanon in 6-Hydroxyhexanoat umwandelt. Die Mono-Oxygenase wird daher als Lakton-bildender Typ und der Weg für die Umwandlung von Cyclohexanol in Adipate angenommen; Cyclohexanol führt zu Cyclohexanone führt zu 1-oxa-2-Oxycycloheptane führt zu 6-Hydroxyhexanoate führt zu 6-Oxohexanoate führt zu Adipate; für die Schlüsselintermediäre chromatographisch identifiziert wurden, ist identisch mit dem Weg für die Oxidation von Cyclohexanol durch Nocardia globerula CL1.
Mehrere Formen der menschlichen Glutathion-S-Transferase und ihre Affinität für Bilirubin. Der anfängliche enzymatische Schritt bei der Bildung von Mercapturinsäure wird durch Glutathion-S-Transferase katalysiert. Mehrere Arten dieses Enzyms, benannt als Transferasen alpha, beta, gamma, delta und epsilon auf der Grundlage der zunehmenden isoelektrischen Punkte, wurden aus der menschlichen Leber isoliert. Beweise werden vorgelegt, dass jede der gereinigten Arten in Bezug auf Natrium-Dodezylsulfat-Gel-Elektrophorese homogen ist. Transferasen alpha, beta und epsilon erscheinen jeweils als ein einzelnes Band auf dem Gel-Elektrofokus; Gamma- und Delta-Transferasen sind als zwei und drei Bands vorhanden, wobei jedes Band katalytisch aktiv ist. Die Aminosäureanalyse zeigte, dass die fünf Transferasen in dieser Hinsicht entweder sehr eng miteinander verbunden oder identisch sind. Alle Enzymarten haben ein Molekulargewicht von etwa 48500 und bestehen aus zwei scheinbar identischen Untereinheiten. Das Spektrum der Substrate ist für jeden gleich, obwohl sich die Enzyme in der spezifischen Aktivität leicht unterscheiden. Wie bei den Leberenzymen der Ratten bindet jede der menschlichen Transferasen Bilirubin, obwohl diese Verbindung kein Substrat ist.
Hydrophobe Wechselwirkung durch Partition in wasserförmigen Zweiphasen-Systemen bestimmt. Teilung von Proteinen in Systemen, die Fettsäureester von Poly (Ethylenglykol) enthalten. In diesem Bericht beschreiben wir eine neue Methode, die nützlich ist, um hydrophobe Wechselwirkungen zwischen aliphatischen Kohlenwasserstoffketten und Proteinen in einer wässrigen Umgebung zu messen. Die Methode basiert auf der Teilung von Proteinen in einem wässrigen Zwei-Phasen-System, das Dextran und Poly (Ethylenglykol) und verschiedene Fettsäureester von Poly (Ethylenglykol) enthält. Die Partition wird unter Bedingungen gemessen, unter denen Beiträge aus elektrostatischen Wechselwirkungen eliminiert werden. Der Unterschied in der Teilung von Proteinen in Phasensystemen mit und ohne Kohlenwasserstoffgruppen, die an Poly (Ethylenglykol), Deltalog K gebunden sind, wo K der Partitionskoeffizient ist, wird als Maßstab für hydrophobe Wechselwirkung genommen. Deltalog K variiert je nach Größe der Kohlenwasserstoffkette und Art des Proteins. Die Länge der aliphatischen Kette sollte größer sein als 8 Kohlenstoffatome, um eine messbare Wirkung in Bezug auf Deltalog K. Rinderserumalbumin, Beta-Laktoglobulin, Hämoglobin und Myoglobin haben gezeigt, unterschiedliche Affinitäten für Palmitinsäureester von Poly(Ethylenglykol). Für Ovalbumin, Zytochrom C oder Alpha-Cymotrypsinogen A konnte keine hydrophobe Wirkung beobachtet werden.
Phosphofructokinase mit Spin-Label. Ein einfacher und direkter Ansatz zur Untersuchung der allosterischen Gleichgewichte unter nahe physiologischen Bedingungen. Kaninchenmuskelphosphofructokinase, spin-etikettiert an seiner reaktivsten Thiol-Gruppe, hat ein Elektron-Spin-Resonanz-Spektrum, das sehr empfindlich auf die Bindung von Substraten und allosterischen Effektoren ist. Die spektralen Veränderungen wurden in Bezug auf einen konzertierten allosterischen Übergang zwischen zwei konformativen Zuständen mit nicht ausschließlicher Bindung von Effektoren interpretiert. Auf dieser Grundlage verhalten sich MgATP, Fructose 6-Phosphat plus ATP und NH + 4 Ionen als potente positive Effektoren, anorganisches Phosphat, Sulfat, AMP, Fructose 6-Phosphat und Fructose 1,6-Bisphosphat sind weniger potente Aktivatoren, und freies ATP und H + Ionen sind negative Effektoren, in Übereinstimmung mit dem kinetischen Verhalten, aber Citrat verhält sich abnormal. Darüber hinaus kann das allosterische Gleichgewicht in den hemmten Zustand verschoben werden, indem zwei weitere Thiolgruppen selektiv modifiziert werden. Starke positive Kooperativität tritt unter geeigneten Bedingungen mit ATP, Metall-ATP und Fruktose 6-Phosphat auf. Bifasische Veränderungen der Konformation, die auf Bindung an den katalytischen und hemmenden Stellen zurückzuführen sind, wurden bei Titrierungen mit ATP beobachtet. Die Differenzierung der beiden ATP-Bindungsstellen entsteht in Gegenwart von Fruktose 6-Phosphat aufgrund einer unterschiedlichen konzertierten Wirkung auf die Konformation zwischen den beiden Substraten an der aktiven Stelle. Eine ähnliche Wirkung tritt zwischen ATP und Citrat auf. Andere heterotrope Effekte sind mit einfachen Modellen konsistent; Phosphaten begünstigen die Bindung und reduzieren die Kooperativität von Fructose 6-Phosphat und Metall-ATP, während überschüssige ATP- und H+-Ionen die Bindung antagonisieren und die Kooperativität von Fructose 6-Phosphat erhöhen. Die Beobachtungen beziehen sich gegebenenfalls auf bestehende kinetische und bindende Studien. Anomale Merkmale des Verhaltens deuten darauf hin, dass das Modell nur als erste Annäherung betrachtet werden sollte.
Cytochrom C interagiert mit Membranen. Absorptions- und Emissionsspektren und Bindungseigenschaften von Eisenfreiem Zytochrom c. Ein Zytochrom-C-Derivat, aus dem Eisen entfernt wird, wurde vorbereitet und gekennzeichnet. Mehrere Hinweise deuten darauf hin, dass native und porphyrin-cytochrom c ähnliche Konformationen haben: Sie haben ähnliche Eleutionsmerkmale auf Sephadex-Gel-Chromatographie; in beiden Proteinen ist die Tryptophan-Fluoreszenz ausgeschaltet und die pK-Werte der Protonation des Porphyrin sind identisch. Porphyrin-Cytochrom c ersetzt weder das native Citochrom c in der Oxidase-Reaktion noch bei der Wiederherstellung des Elektronentransports in den mit Cytochrom-C-geschwächten Mitochondrien. Es hemmt jedoch wettbewerbsfähig das native Zytochrom c in diesen Reaktionen, wobei der Ki für die Hemmung größer ist als der Km für die Reaktion. Das Absorptions- und Emissionsspektrum sowie das polarisierte Erregungsspektrum des Porphyrin-Cytochroms c sind charakteristisch für freie Basenporphyrin. Die Abwesenheit der Fluoreszenz-Auslöschung von Porphyrin-Cytochrom c, wenn das Protein an Zytochrom-Oxidase gebunden ist, deutet darauf hin, dass der Heme-Heme-Abstand zwischen diesen Proteinen je nach Orientierung größer als 0,5 bis 0,9 nm ist. Die Bindung des Porphyrin-Cytochroms c an Phospholipide oder Mitochondrien erhöht die Fluoreszenzpolarisierung eines positiv polarisierten Absorptionsbandes, was darauf hindeutet, dass die gebundene Form des Proteins sich nicht innerhalb der Zeitskala der Entspannung vom aufgeregten Zustand frei dreht.
Die Trypsin- und Chymotrypsin-Inhibitoren in Hühnerbeeren (Cicer arietinum L.). Reinigung und Eigenschaften der Inhibitoren. Aus einem rohen Extrakt aus Hühnergras (Cicer arietinum L.) wurden Inhibitoren von Trypsin und Chymotrypsin durch Affinitätschromatographie auf einer Spalte von Trypsin-Sepharose 6B isoliert. Der Gehalt an Inhibitoren betrug 1,5 g/kg. Sie wurden weiter in sechs Isoinhibitoren durch Ionen-Austausch-Chromatographie auf DEAE-Sephadex A-25 getrennt. Zwei der Isoinhibitoren machten etwa 50% der isolierten Inhibitoren aus und wurden weiter zu einem homogenen Zustand gereinigt. Die Isoinhibitoren hatten ein Molekulargewicht von etwa 10.000, wie durch Molekular-Sieve-Chromatographie auf Sephadex G-75 bestimmt. Sie waren stabil gegenüber extremen pH-Werten und Temperaturen bis zu 75 Grad Celsius oder gegen die Verdauung durch Pepsin. Sie waren auch stabil in 6 M Urea, aber nicht in 6 M Guanidin-HCl. Die intakten Inhibitoren wurden zerstört, wenn die Erdbeeren bei 100 ° C gekocht wurden oder wenn sie bei 130 ° C gebraten wurden Die vier Hauptinhibitoren hatten ähnliche Aminosäurezusammensetzungen und enthielten keine nachweisbaren Mengen an freien Sulfhydrylgruppen, Tryptophan oder Kohlenhydraten. Cystein ist das dominante Aminosäurerückstand in allen von ihnen und machte etwa 20% ihres Aminosäuregehaltes aus. Der isoelektrische Punkt der Isoinhibitoren liegt im pH-Bereich von 4,9-8,6 und zwei der wichtigsten Inhibitoren hatten isoelektrische Punkte von pH 4,75 und pH 4,96. Sie hemmten Chymotrypsin im gleichen Ausmaß, unterschieden sich jedoch in ihrer hemmenden Aktivität gegenüber Trypsin, was darauf hindeutet, dass sie Mischungen nativer und trypsinmodifizierter Formen sind und dass sie wahrscheinlich separate Standorte für die beiden Enzyme haben. Sie hemmten keine anderen proteolytischen Enzyme, die zu zwei Gruppen gehörten (z. B. Serin- oder Cystein-Enzyme) oder aus verschiedenen Quellen stammen (z. B. Tiere, Pflanzen oder Bakterien).
Untersuchungen der Struktur der 3-Methylcrotonyl-CoA-Carboxylase von Achromobacter. Es wurde durch Gel-Elektrophorese in Natrium-Dodezylsulfat-Lösung gezeigt, dass 3-Methylcrotonyl-CoA-Carboxylase aus Achromobacter IVS aus zwei verschiedenen Untereinheiten mit einem Molekulargewicht von etwa 78000 und 96000 besteht. Das Biotin bindet an die schwerere Untereinheit. Es wurde zuvor festgestellt, dass 3-Methylcrotonyl-CoA Carboxylase vier Biotinmoleküle pro Komplex enthält. Ein Komplex, das aus vier jeder Untereinheit besteht, hätte also ein Molekulargewicht von etwa 700.000. Dies ist mit dem Molekulargewicht von 760000 kompatibel, das zuvor durch analytische Ultrazentrifugation bestimmt wurde. Beide Sub-Einheiten wurden vorbereitend isoliert. Da die Untereinheiten im Gegensatz zum Komplex sehr empfindlich auf Sauerstoff reagieren, mussten während der Isolierung besondere Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden. Die biotinhaltige Untereinheit wurde durch Chromatographie auf DEAE-Cellulose in 5 M Urea isoliert. Es katalysierte die Gesamtreaktion nicht mehr, konnte aber immer noch freies Biotin karboxylieren. Die biotinfreie Untereinheit wurde nach Dissoziation des Enzyms durch dreitägige Dialyse bei pH 9,8 unter Stickstoff getrennt. Bei der Chromatographie über einer Sepharose-gebundenen Avidin-Spalte wurde die Biotin-Untereinheit fixiert und die biotinfreie Untereinheit ohne Verzögerung eludiert. Die letztere Subunität zeigte keine enzymatische Aktivität. Nach dem Zusatz der biotinhaltigen Untereinheit wurde die Gesamtaktivität regeneriert. Die Geschwindigkeit der Wiedervereinigung wird durch 3-Methylcrotonyl-CoA stark verstärkt. Es wurde durch Reassociationsexperimente unter verschiedenen Bedingungen gezeigt, dass wahrscheinlich ein anfänglicher Komplex, AxBy, gebildet wird, der eine Bindungsstelle für 3-Methylcrotonyl-CoA besitzt. Bei der Bindung dieses Substrats kann die Konformation in eine für die Rekonstitution günstige Form geändert werden. Schließlich werden die Strukturen von Biotin-Enzymen aus verschiedenen Quellen verglichen. Im Verlauf der Evolution gibt es eine Tendenz zur Integration der verschiedenen Bestandteile Proteine in nur eine Polypeptidkette.
Polyadenylierte RNA von Vicia faba meristematischen Wurzelzellen. Lokalisierung und Größenabschätzung des Poly (A) Segments. Nach der Inkubation von Wurzelapillen aus zweitägigen Bohnenpflanzen mit [3H] Adenin wurde die RNA aus ganzen Zellen oder Polysomen extrahiert, und die Poly (A) Sequenzen wurden durch Nuklease-Verdauung isoliert, gefolgt von Poly(U)-Sepharose-Chromatographie. Die Veränderungen der RNA-Molekülen aufgrund der verschiedenen Behandlungen wurden durch Saccharose-Dichte-Gradienten überwacht. Es wurde festgestellt, dass sequentielle Extraktion zuerst bei pH 7,6 und dann bei pH 9,0 nicht zu einer Trennung zwischen RNA schlecht in Poly(A) Sequenzen und Poly(A)-reich RNA führte. Darüber hinaus ergab die chromatographische Analyse von Hydrolysaten aus nukleasebeständigem RNA, die entweder bei pH 7,6 oder pH 9.0 extrahiert wurden, dass AMP fast 95% der Basen ausmachte und dass sich die Poly(A) Sequenzen, etwa 200 Basen, am 3' Endpunkt der polyadenylierten RNA befanden. Es wurden keine Größenunterschiede für das Poly(A)-Segment zwischen dem pH-7,6-extrahierten RNA und dem bei pH 9.0 extrahierten RNA gefunden.
Zeitabhängige Hemmung der Diaminoxidase durch Carbonyl-Gruppe-Reagenzien und Harnstoff. Das Verhalten mehrerer Carbonylgruppe-Reagenzien und Harnstoff als zeitabhängige Inhibitoren sowohl der Schweine-Nieren- als auch der menschlichen Plazenta-Diamin-Oxidase wird beschrieben. Plots von log (vt/vo) gegen die Zeit waren mit diesen Reagenzien nicht linear, wie die üblichen Theorien voraussagen. Dies war insbesondere bei Aminoguanidin und Phenylhydrazin der Fall und eine gründliche Studie der Auswirkungen dieser Verbindungen auf die menschliche Plazenta-Diamin-Oxidase wird beschrieben. Durch die Anwendung einer neuen Theorie der zeitabhängigen Hemmung wird die Hemmung der Diaminoxidase durch Aminoguanidin und Phenylhydrazin angemessen berücksichtigt. Die zeitabhängige Erholung der Aktivität durch Zugabe von Natriumpyruvat schlug vor, dass die verwendeten Verbindungen ausschließlich als Carbonylgruppe-Reagenzien wirken und durch Schiff-Base-Bildung an der aktiven Carbonylgruppe hemmen.
Acetylglucagon: Zubereitung und Charakterisierung. Acetylierte Derivate von Glucagon wurden durch Reaktion dieses Hormons unter verschiedenen Bedingungen mit Essiganhydrid hergestellt. Sie wurden chemisch durch die Verwendung eines 14C-labelten Reagenzs, durch Peptid-Mapping-Techniken nach Hydrolyse durch Pronase und Chymotrypsin und durch Spektroskopie gekennzeichnet. Die Acetylierung in Natriumacetat (pH 5,5) führt zu einer vollständigen Substitution der Alpha-Aminogruppe des N-Terminal-Histidylrückstands, aber zu einer teilweisen (etwa 0,3 Acetylgruppe pro Rückstand) Substitution der Epsilon-Aminogruppe des Lysylrückstands 12. Die monosubstituierten (auf der Alpha-Aminogruppe) und die disubstituierten (auf beiden Aminogruppen) acetylierten Komponenten wurden durch Chromatographie auf DEAE-Cellulose und CM-Cellulose getrennt. Die Acetylierung in Natriumbicarbonat (pH 8.0) führt zu einer vollständigen Substitution sowohl der Aminogruppen als auch der Hydroxylgruppen der Tyrosylrückstände 10 und 13. Die vollständige Deacetylierung der O-Acetyltyrosyl-Reststoffe tritt bei der Behandlung mit Hydroxylamin auf. Mono, di und tetraacetylglucagon sind homogen, wenn sie durch Disc-Gel-Elektrophorese analysiert werden; di und tetrasubstituierte Derivate zeigen eine erhöhte Mobilität in Richtung der Anode. 125I-labelte Derivate von Acetylglucagon zeigen höhere Verteilungskoeffizienten im wasserförmigen Zwei-Phase-Dextran/Poly(Ethylenglykol) System als ähnliche Derivate von Glucagon. Die Acetylierung verringert parallel die Fähigkeit von Glucagon, die Aktivität von Adenylatcyclase zu stimulieren und sich an seine Rezeptoren in den Leberzellmembranen der Ratte zu binden. Die biologischen Potenzen der mono-, di- und tetrasubstituierten Derivate betragen jeweils etwa 10, 1 und 0, 1 % des nativen Glucagon. Die Bindungseigenschaften des Materials, das vom Acetylglucagon-Rezeptor-Komplex getrennt ist, deuten darauf hin, dass die Verringerung der biologischen Aktivität durch eine Abnahme der intrinsischen Affinität des modifizierten Glucagons für die Rezeptoren sowie durch das Vorhandensein kleiner Mengen des restlichen, unreaktiven Glucagons resultiert. Studien mit 125I-labelten Derivaten von Glucagon deuten darauf hin, dass die Acetylierung die Assoziationsrate verringert und die Dissoziationsrate des Hormon-Rezeptor-Komplexes erhöht.
Reinigung und Eigenschaften einer periplasmalen Aminoendopeptidase aus Escherichia coli. Eine periplasmale Aminoendopeptidase aus Escherichia coli wurde zur Hämogenität gereinigt. Es ist ein Monomer mit Molekulargewicht 45000 und enthält eine - SH-Gruppe, die für die katalytische Aktivität notwendig ist. Die Untersuchung der Substratspezifität zeigte, dass das Enzym sowohl Aminopeptidase als auch Endopeptidaseaktivität hat. Der optimale pH-Wert für die Hydrolyse von L-Alanin p-Nitroanylid liegt zwischen 7 und 7,5 und für die Proteolyse von 125I-Kasein zwischen 7,3 und 7,6. Die Aktivierungsenergie für die Hydrolyse von L-Anin p-Nitroanilid wurde auf 5,3 kcal X mol-1 (22,2 kJ X mol-1) berechnet.
Die Wechselwirkung von organischen Phosphaten mit menschlichem und Hühnerhämoglobin. In dieser Studie wurden die Bindungseigenschaften von Inositol-Hexaphosphat und 2,3-Bisphosphoglycerat an Hühner- und Humandeoxyhemoglobin und Carboxyhemoglobin verglichen. Es stellte sich heraus, dass in allen Fällen die Bindung an Hühnerhämoglobin viel stärker ist als an menschliches Hämoglobin. Dies ist höchstwahrscheinlich darauf zurückzuführen, dass 4 der 12 Rückstände, die für die Bindung von Phosphaten im Hühnerhämoglobin verantwortlich sind, Arginine sind. Diese fehlen im menschlichen Hämoglobin, wo die Bindungsstelle bis zu nur 8 Rückstände besteht. Für Hühnerhämoglobin konnte eine starke Bindungsstelle sowohl in unliganded als auch in liganded Hämoglobin beobachtet werden. Aus diesen Beobachtungen schließen wir, dass dieselbe Bindungsstelle sowohl in der Sauerstoff- als auch in der Deoxy-Struktur beteiligt ist und in den beiden Konformationszuständen unterschiedliche Affinität zu Phosphaten aufweist. Für das menschliche Hämoglobin kamen wir zu demselben Schluss.
Hepatische Nukleasen Extrahepatischer Ursprung und Assoziation der neutralen Leberribonuklease mit Lysosomen. In der großen granulären Fraktion der Rattenleber ist die Dichteverteilung der inhibitor-empfindlichen neutralen Ribonuklease ähnlich wie bei Säurehydrolasen und ihre Dichteverteilung wird ähnlich durch Triton WR-1339 Akkumulation in Lysosomen modifiziert. Partikelneutrale Ribonuklease ist latent; das Enzym wird durch sehr niedrige Konzentrationen von Digitonin oder hypoosmotischen Schock enthüllt. Diese Beobachtungen zeigen, dass der Großteil der Leberneutralen Ribonuklease mit dem lysosomalen System assoziiert ist. Angesichts des neutralen pH-Optimums des Enzyms und einiger Besonderheiten seiner Verteilung in Fraktionierungsversuchen wurde die Möglichkeit einer extrahepatischen Herkunft der neutralen Ribonuklease untersucht. Nach einer partiellen Pankreatektomie wird eine signifikante Abnahme sowohl der Plasma- als auch der Leberneutralen Ribonuklease beobachtet. Der Effekt ist spezifisch, da er bei anderen lysosomalen Enzymen nicht auftritt. Auch gekennzeichnet Rinder-Pankreas-Ribonuklease, wenn intravenös injiziert, wird von der Leber aufgenommen. Das sedimentar markierte Enzym hat eine Dichteverteilung ähnlich wie die Verteilung anderer fremder Proteine, Pferderasperoxidase oder Hefe-Invertase. Diese Ergebnisse werden durch die Aufnahme der plasma-neutralen Ribonuklease von Pankreasursprung durch die Leber erklärt.
Glutathion-Reduktase aus menschlichen Erythrozyten. Molekulargewicht, Zusammensetzung der Untereinheiten und Aggregationseigenschaften. Glutathionreduktase aus menschlichen Erythrozyten existiert hauptsächlich als Einheit von 100.000 Molekulargewicht unter verschiedenen Bedingungen von pH und Ionenstärke. Die S20,W von 5,5 S und D20W von 50 mum2/s korrelieren mit dem Molekulargewicht, das durch Sedimentationsgleichgewicht bestimmt wird. Die Homogenität dieser Art hängt in erster Linie vom Vorhandensein von Thiolen und zweitens von hohen Salzkonzentrationen ab. Die Aminosäurezusammensetzung des Enzyms zeigt Ähnlichkeiten sowohl mit Glutathion-Reduktasen aus anderen Quellen als auch mit Lipoamid-Dehydrogenase. Aus dem Flavin-Gehalt und der Dodezylsulfat-Polyacrylamid-Elektrophorese folgt, dass das native Enzym ein Dimer ist, der aus ähnlichen Subeinheiten von 50.000 Molekulargewicht besteht. In Abwesenheit von Thiolen zeigt Glutathionreduktase eine Tendenz zur Bildung von Tetramern und größeren Aggregaten. Obwohl diese größeren Arten auch katalytisch aktiv sind, sollte unter zellulären Bedingungen das Vorhandensein seines Produkts, reduziertes Glutathion, das Enzym als dimerische Entität aufrechterhalten.
GAMMA-Glutamyltranspeptidase des Schaf-Nierenkortex. Isolation, katalytische Eigenschaften und Dissoziation in zwei Polypeptidketten. Gamma-Glutamyl-Transpeptidase wurde aus der Nierenschale von Schafen als scheinbar homogenes, hochaktives Protein isoliert. Bei einem optimalen pH-Wert und in Abwesenheit von Acceptoren katalysiert das Enzym die Freisetzung von etwa 510 Mumolen P-Nitroanilin pro mg Protein pro Minute aus dem Modellsubstrat L-Gamma-Glutamil-P-Nitroanilid. Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese in einem Natrium-Dodezylsulfat-Buffersystem zeigte das Vorhandensein einer großen (Mr ungefähr 65000) und einer kleinen (Mr ungefähr 27000) Polypeptidkette. Dissoziation in zwei Polypeptidketten wurde auch in 8 M Urea erreicht. Amidination mit Dimethylsuberimidat erzeugte ein kreuzverbundenes Protein mit einem Molekulargewicht von ungefähr 90.000. Im Verlauf dieser Arbeit wurde ein bequemes Verfahren zur Bestimmung der Gamma-Glutamil-Transpeptidase-Aktivität mit L[Glycine-2-3H]Glutathion als Substrat entwickelt. In diesem Verfahren folgt die Freisetzung von Cysteinyl-[2-3H]Glycin aus Glutathion, nachdem das radioaktive Di-Peptid von unreagiertem Glutathion auf einer kleinen Dowex-1-Acetat-Spalte getrennt wurde. Die Reaktionen mit gamma-glutamil-p-nitroanilide und glutathion werden beide stark durch mehrere Metallionen (Ca2+, Mg2+, Na+ und K+) und durch eine Reihe von Aminosäuren und Peptidakzeptoren aktiviert. Die Produkte der Reaktion mit Glutathion wurden als Cysteinylglycin, Gamma-Glutamylglutathion und Glutamat identifiziert. Die Bildung dieser Produkte entspricht der Funktion der Gamma-Glutamil-Transpeptidase sowohl in der Gamma-Glutamil-Transferreaktion als auch in der Hydrolyse der Gamma-Glutamil-Bindung. Die aktivierende Wirkung von Metallionen in der Reaktion mit Glutathion zeigte sich von der Beschleunigung der Transferreaktion abhängig zu sein; die Geschwindigkeit der Hydrolyse der Gamma-Glutamilbindung blieb unverändert.
Pyrophosphatase und Glucuronosyltransferase im mikrosomalen UDP-Glucuronsäure-Metabolismus in der Rattenleber. Eine radiochemische Methode für die Studien über den mikrosomalen UDP-Glucuronsäure-Metabolismus wurde entwickelt. Die Rattenleber-Mikrosomen verursachten eine schnelle Hydrolyse von UDP-Glucuronsäure zu D-Glucuronsäure 1-Phosphat und weiter, wenn auch viel langsamer, um D-Glucuronsäure freizugeben. Im Tris-HCl-Buffer (pH 7,4) wurden sie im Verhältnis 72:1 produziert. Es wurden keine anderen Metaboliten in messbaren Mengen gefunden. Die Pyrophosphatase, die UDP-Glucuronsäure spaltete, zeigte einen pH-Optimum bei 8,9, aber die Freisetzung von D-Glucuronsäure aus UDP-Glucuronsäure hatte zwei pH-Maximale (pH 3,5 und 8,5). EDTA schien ein weniger starker Inhibitor der Pyrophosphatase zu sein, als zuvor vorgeschlagen wurde. Etwa 25 Prozent der UDP-Glucuronsäure-Hydrolysieraktivität blieben noch in Gegenwart von 10 mM EDTA. Es wurde festgestellt, dass D-Glucaro-1,4-Lakton eine leichte hemmende Wirkung auf die Pyrophosphatase-Aktivität hat. Citrate hemmt stark die Hydrolyse der UDP-Glucuronsäure und die Freisetzung der freien D-Glucuronsäure. Phosphate war auch inhibitorisch. In Gegenwart eines exogenen UDP-Glucuronosyltransferase-Substrats, 4-Nitrophenol, wurde die Bildung von D-Glucuronsäure 1-Phosphat und freier D-Glucuronsäure leicht reduziert, und D-Glucuronsäure 1-Phosphat, 4-Nitrophenylglucuronid und freie D-Glucuronsäure wurden im Verhältnis 78 : 23 : 1 produziert. Als 10 mM EDTA hinzugefügt wurde, um den hydrolytischen Verbrauch des Glucuronyl-Spender-Substrats zu verringern, war das entsprechende Verhältnis immer noch so ungünstig wie 19 : 2,6 : 1. Die messbare Aktivität der UDP-Glucuronosyltransferase war in Gegenwart von Phosphat oder Citrate niedriger als im Tris-HCl-Puffer, obwohl sie das Glucuronyl-Spender-Substrat vor Hydrolyse schützten. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass die Hydrolyse der UDP-Glucuronsäure auch bei hinzugefügten Glucuronylakzeptorsubstraten die Konjugation in Rattenlebermikrosomen dominiert. Die Geschwindigkeit der Hydrolyse von UDP-Glucuronsäure ist auch in Gegenwart von EDTA ziemlich beträchtlich, und es wird empfohlen, die UDP-Glucuronsäure-Pyrophosphatase-Aktivität zu kontrollieren, wenn UDP-Glucuronosyltransferase und Glucuronidationsreaktionen untersucht werden. Freie D-Glucuronsäure scheint aus UDP-Glucuronsäure für die weitere Verwendung über D-Glucuronsäure 1-Phosphat hergestellt zu werden, der Rate-begrenzende Schritt ist die Hydrolyse dieses Zwischenprodukts. UDP-Glucuronosyltransferase, Glucuronide entweder endogener oder exogener Aglykonen und Beta-Glucuronidase spielen in dieser Hinsicht nur eine geringfügige Rolle in Rattenlebermikrosomen.
Einbeziehung von (1-14C)palmitoyl-CoA in Phosphatidylcholin durch Plasmamembranen von Ratten submaxillären Drüsen in vitro. Bei der Inkubation mit den isolierten Ratte submaxilläre Drüsenplasma-Membranen, [1-14C]palmitoyl-CoA wurde hauptsächlich in Phosphatidylcholin integriert und hydrolysiert zu [1-14C]palmitic Säure und CoASH. Die Zugabe von Lysophosphatidylcholin verstärkte die Aufnahme in Phosphatidylcholin und senkte die Hydrolyse von Palmitoyl-CoA deutlich. In Gegenwart von Lysophosphatidylcholin war die Palmitoyl-CoA-Integration in Phosphatidylcholin bei 0,1 mM Palmitoyl-CoA, 0,5 mM Lysophosphatidylcholin und zwischen pH 7.0 und 9.0 maximal. Die Aufnahme in Phosphatidylcholin wurde durch Na+, K+ und K-stimuliert, durch Ca2+ und Mg2+ hemmt und nicht durch Natriumdeoxycholat und ATP beeinflusst. Epinephrin hemmte die Aufnahme von Palmitoyl-CoA in Phosphatidylcholin in Gegenwart oder Abwesenheit von ATP, wobei die Hemmung mehr in Gegenwart von ATP als in seiner Abwesenheit war. Dibutyryl-Adenosin 3':5'-Monophosphat nachahm die hemmende Wirkung von Epinephrin.
Wasserstoff-Isotop-Austausch von oxidiertem und reduziertem Zytochrom c. Ein Vergleich von Massenspektrometrie und Infrarotmethoden. Der Wasserstoff-Deuterium-Austausch in 2H20-Lösungen der beiden Redox-Zustände des Pferdeherzzytochroms c wurde bei 20 Grad C, pH 7, durch Massenspektrometrie und Infrarotspektroskopie untersucht. Massenspektrometrie zeigt an, dass das Ferricytochrom nach 24 Stunden 20 unveränderte Wasserstoffe hat, 28 Wasserstoffe zwischen 10 min und 24 h tauschen und 156 Wasserstoffe innerhalb von 10 min tauschen; Vergleichswerte für das Ferrocytochrom sind 45, 19 und 140. Die Verschiebung der Wechselkurven, die durch Infrarot erhalten werden, entspricht 8 bis 9 Peptidwasserstoffen. Diese kombinierten Methoden zeigen, dass viele Nicht-Peptid-Wasserstoffe schnell austauschen (87 und 79 für Ferricytochrom c bzw. Ferrocytochrom c), während andere, wahrscheinlich in dem Molekül begraben und an Wasserstoffbindungen beteiligt sind, auch nach 24 Stunden nicht ausgetauscht werden (14 und 30 Wasserstoffe, was für ein kleines Protein relativ groß ist). Infrarotergebnisse werden in Bezug auf Änderungen der normalen freien Energie für die transconformationale Reaktion gegeben, die die Peptidwasserstoffe zum Lösungsmittel aussetzt: Im Ferricytochrom c und Ferrycoytochrom c werden 30% und 40% der Peptidwasserstoffe durch konformationelle Übergänge geschützt, die um mehr als 5 kcal/mol (21 kJ/mol) stabilisiert sind, was eine große Steigerung der Steifigkeit für die reduzierte Form impliziert.

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